99精产国品一二三产区,国产无遮挡又黄又爽又色,大地资源电影中文在线观看,久久99精品久久久大学生

Carrier DNA (鮭魚精DNA) 為短的線形單鏈DNA，可包裹質粒DNA，在酵母細胞攝取外源質粒DNA過程中發揮作用，促進質粒進入酵母細胞，另外還可保護質粒免于被DNA酶降解。在每次使用前務必進行兩次熱變性，保證Carrier DNA在轉化實驗體系中以單鏈形式存在。

初次使用Carrier DNA，請把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃儲存備用。下次使用時請在冰上解凍Carrier DNA。

酵母感受態細胞的制備：

1.活化菌種。-80℃保存的菌種在固體YPDA培養基（YPDA加20g Agar/L）上劃線，在30℃培養2-4天。

2.挑取酵母單菌落在固體YPDA培養基上劃3-5 mm的短線，在30 ℃培養2-4天。待酵母單菌落長至2 mm長時，接種。

3.**把酵母細胞接種到3 ml液體YPDA培養基中，30℃過夜培養。

4.**天轉接到含有30 ml液體YPDA培養基的三角瓶中繼續培養，待OD600到0.4-0.5范圍內。收集細胞，1000 g，離心5 min, 去上清。

5.沉淀用30-50 ml的無菌的去離子水懸浮。1000 g，離心5 min，去上清。

6.沉淀用合適體積的100 mM LiAc懸浮（30 ml的酵母菌**用不超過1 ml的100 mM LiAc懸浮，通常100 μl的酵母細胞用于轉化一個質粒，即一個反應）。

7.把酵母細胞的懸浮液分裝到1.5 ml的離心管中，每管分裝100 μl，用于轉化一個質粒即一個反應。1000 g，離心5 min，去上清。制備好的感受態細胞備用。

酵母轉化：

1.配制預混液，每轉化一個質粒即一個反應需要360 μl的預混液。

2.吸取360 μl的預混液加入到感受態細胞中，用槍頭反復吹吸沉淀，使離心管底的酵母細胞徹底地懸浮在含有PEG的預混液中。

3.放置在30 ℃的水浴鍋中孵育30 min，每10 min混勻一次。

4.放置在42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。

5.12000 rpm，離心1 min，去掉上清液。

6.沉淀中加入100 μl的無菌的去離子水，懸浮沉淀。

7.把酵母細胞涂到相應的酵母培養基平板上，30℃培養2-4天。

注意事項：

1. 初次使用Carrier DNA，請把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃儲存備用。下次使用時請在冰上解凍Carrier DNA。

2. PEG溶液在低溫環境下會析出，請于常溫環境下完全溶解后使用。

3. 轉化全程要無菌操作。