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感受態細胞制備：

1.活化菌種。-80 ℃保存的菌種在YPDA培養基平板上劃線，30 ℃培養2-4天。

2.挑取酵母單菌落在YPDA培養基平板上劃3-5 mm的短線，30 ℃培養2-4天。

3.待酵母單菌落長至直徑2 mm時，把酵母細胞接種到3 mL YPDA液體培養基中，30 ℃過夜培養。

4.**天轉接到含有30-50 mL YPDA液體培養基的三角瓶中繼續培養，待OD600達到0.4-0.5，3000 rpm離心5 min，棄上清。

5.沉淀用30-50 mL的無菌的去離子水懸浮。3000 rpm離心5 min，棄上清。

6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc（150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL無菌水）重懸后轉移至1.5 mL離心管中，3000 rpm離心5 min，棄上清。

注意：10 × LiAc Solution經過pH緩沖，無需添加TE作為緩沖劑。

7.加入1 mL 1 × LiAc重懸，小體積轉化按照每管100 μL分裝，用于文庫轉化不分裝。

8.3000 rpm離心5 min，棄上清，感受態細胞即制備完畢。

注意：制備好的感受態**立即使用，在第8步離心前，室溫放置不應超過5小時。

轉化預混液配制：

酵母質粒轉化：

1.將360 μL預混液加入1支感受態細胞中，反復吹吸沉淀，使酵母細胞徹底懸浮于預混液中。

2.30 ℃的水浴鍋中孵育30 min，每10 min混勻一次。

3.（加入20 μL DMSO，可選）42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。

4.12000 rpm離心15 s，棄上清液。

5.（可選步驟）用1 mL YPD Plus Liquid Medium重新懸浮，30℃搖床震蕩培養30-60 min。12000 rpm離心15 s，棄上清液。

6.加入0.1-1 mL無菌去離子水或0.9%氯化鈉溶液重懸沉淀，涂篩選培養基平板，30 ℃培養2-4天。

酵母文庫轉化：（需用15-50 mL離心管）

1. 將2520 μL預混液加入到感受態細胞（未分裝）沉淀中，震蕩使感受態細胞充分重懸。

2. 放置在30 ℃的水浴鍋中孵育50 min，每10 min混勻一次。

3.（加入160 μL DMSO，可選）放置在42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。

4. 3000 rpm離心5 min，棄上清液。

5.（可選步驟）用3 mL YPD Plus Liquid Medium重懸沉淀，30 ℃搖床震蕩培養90 min，3000 rpm離心5min，棄上清液。

6.加入15 mL無菌去離子水或0.9% 氯化鈉溶液重懸菌體，涂篩選培養基平板（50個平板左右），30 ℃培養2-4天。

注意事項：

1.轉化全程需無菌操作。

2.初次使用Carrier DNA，請把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后-20℃儲存備用。下次使用前在冰上解凍Carrier DNA。反復凍融3-5次后需重新變性Carrier DNA。

3.PEG溶液在低溫環境下會析出，請于常溫環境下完全溶解后使用。

4. 根據質粒濃度增減體積，增加酵母質粒的純度和濃度可以提高轉化效率。