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感受態(tài)細(xì)胞制備：

1.活化菌種。-80 ℃保存的菌種在YPDA培養(yǎng)基平板上劃線，30 ℃培養(yǎng)2-4天。

2.挑取酵母單菌落在YPDA培養(yǎng)基平板上劃3-5 mm的短線，30 ℃培養(yǎng)2-4天。

3.待酵母單菌落長(zhǎng)至直徑2 mm時(shí)，把酵母細(xì)胞接種到3 mL YPDA液體培養(yǎng)基中，30 ℃過夜培養(yǎng)。

4.**天轉(zhuǎn)接到含有30-50 mL YPDA液體培養(yǎng)基的三角瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，待OD600達(dá)到0.4-0.5，3000 rpm離心5 min，棄上清。

5.沉淀用30-50 mL的無菌的去離子水懸浮。3000 rpm離心5 min，棄上清。

6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc（150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL無菌水）重懸后轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，3000 rpm離心5 min，棄上清。

注意：10 × LiAc Solution經(jīng)過pH緩沖，無需添加TE作為緩沖劑。

7.加入1 mL 1 × LiAc重懸，小體積轉(zhuǎn)化按照每管100 μL分裝，用于文庫(kù)轉(zhuǎn)化不分裝。

8.3000 rpm離心5 min，棄上清，感受態(tài)細(xì)胞即制備完畢。

注意：制備好的感受態(tài)**立即使用，在第8步離心前，室溫放置不應(yīng)超過5小時(shí)。

轉(zhuǎn)化預(yù)混液配制：

酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化：

1.將360 μL預(yù)混液加入1支感受態(tài)細(xì)胞中，反復(fù)吹吸沉淀，使酵母細(xì)胞徹底懸浮于預(yù)混液中。

2.30 ℃的水浴鍋中孵育30 min，每10 min混勻一次。

3.（加入20 μL DMSO，可選）42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。

4.12000 rpm離心15 s，棄上清液。

5.（可選步驟）用1 mL YPD Plus Liquid Medium重新懸浮，30℃搖床震蕩培養(yǎng)30-60 min。12000 rpm離心15 s，棄上清液。

6.加入0.1-1 mL無菌去離子水或0.9%氯化鈉溶液重懸沉淀，涂篩選培養(yǎng)基平板，30 ℃培養(yǎng)2-4天。

酵母文庫(kù)轉(zhuǎn)化：（需用15-50 mL離心管）

1. 將2520 μL預(yù)混液加入到感受態(tài)細(xì)胞（未分裝）沉淀中，震蕩使感受態(tài)細(xì)胞充分重懸。

2. 放置在30 ℃的水浴鍋中孵育50 min，每10 min混勻一次。

3.（加入160 μL DMSO，可選）放置在42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。

4. 3000 rpm離心5 min，棄上清液。

5.（可選步驟）用3 mL YPD Plus Liquid Medium重懸沉淀，30 ℃搖床震蕩培養(yǎng)90 min，3000 rpm離心5min，棄上清液。

6.加入15 mL無菌去離子水或0.9% 氯化鈉溶液重懸菌體，涂篩選培養(yǎng)基平板（50個(gè)平板左右），30 ℃培養(yǎng)2-4天。

注意事項(xiàng)：

1.轉(zhuǎn)化全程需無菌操作。

2.初次使用Carrier DNA，請(qǐng)把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩Ｏ麓问褂们霸诒辖鈨鯟arrier DNA。反復(fù)凍融3-5次后需重新變性Carrier DNA。

3.PEG溶液在低溫環(huán)境下會(huì)析出，請(qǐng)于常溫環(huán)境下完全溶解后使用。

4. 根據(jù)質(zhì)粒濃度增減體積，增加酵母質(zhì)粒的純度和濃度可以提高轉(zhuǎn)化效率。