熒光染料的一個基本原理是在熒光劑的幫助下對細胞成分進行高度特異性的可視化。
西安齊岳生物提供酶HRP,熒光FITC,Biotin、Cy3、Cy5、Cy7、羅丹明等熒光物質標記蛋白,標記位置是氨基,標記的蛋白有:牛血紅蛋白、膠原蛋白、鏈霉親和素、大鼠免疫球蛋白、牛胎球蛋白、人轉鐵蛋白、胰島素、重組蛋白G等幾十種蛋白,提供檢測圖譜。
它可以是一種熒光蛋白,例如GFP與基因上感興趣的蛋白質有關。如果克隆是不可能的,比如在組織樣本中使用免疫熒光染色等技術來可視化感興趣的蛋白質。因此,使用與不同熒光染料連接并直接或間接與適當目標結構結合的抗體。借助熒光染料,熒光顯微鏡不僅限于蛋白質,還可用于檢測核酸、聚糖等結構。你甚至可以使用特定應用的各種活細胞染料,允許細胞器選擇性染色(如ER、線粒體、高爾基體)或功能測定。例如,熒光是活細胞跟蹤、標記、細胞增殖或活死細胞測定的讀取方式。甚至可以檢測到鈣離子和其他非生物質。
在熒光顯示過程中,有兩種方法可以顯示你感興趣的蛋白質。熒光標記抗體要么借助內部熒光信號將熒光蛋白與靶蛋白基因連接,要么借助結合目標蛋白特異性的熒光標記抗體。對于一些生物學問題,執行后的問題更有用甚至必要。例如,在組織樣本的情況下,不可能使用熒光蛋白,因為樣本通常來自不含熒光蛋白的生物體。熒光蛋白的另一個缺點是它們本身就是蛋白質的性質。有了它,它們在細胞中具有特定的蛋白質特征,這可能導致功能障礙或對附著的感興趣蛋白質的誤解。然而,應考慮使用熒光蛋白通常是研究活細胞的**。
免疫熒光利用抗體對抗原的特異性結合親和力。這可以有兩種不同的外觀。最簡單的方法是使用熒光標記抗體與感興趣的蛋白質結合。這被稱為直接免疫熒光。
在大多數情況下,使用兩種形式的抗體。**種與目標蛋白結合,本身沒有熒光標記(一種抗體)。但**種抗體(二種抗體)與一種抗結核特異性地攜帶熒光染料。這種方法被稱為間接免疫熒光,有幾個優點。一方面,有放大作用,因為不止一種二抗體和一種一抗結核體。另一方面,通常比普通熒光染料標記的特異性一抗體更容易找到二抗體。
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