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保存條件：-20 ℃儲存，未開封**期24個月。

包裝內容：

產品說明：

  本產品用于酵母單雜雙雜篩庫系統，可以快速地擴增、分選并分析文庫篩選所獲得的陽性克隆中prey/文庫質粒的cDNA插入片段。

  PCR Mix含Taq、dNTP、PCR buffer和水，只需要補充模板5 μL，引物混合物1 μL即可用于PCR擴增?？晒?0 μL PCR體系進行200次擴增實驗。3AD & 5AD引物混合物可用于pGADT7、pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2系列載體構建的AD文庫。每50 μL體系加入1 μL引物混合物。亦可根據需要加入自備引物。本試劑盒除提供菌落裂解液I用于平板菌落PCR外（可供200 T），還免費提供菌液裂解液II用于菌液PCR（可供20 T）。

使用方法：

菌落樣品

1.準備PCR預混液：根據檢測克隆數，等比例擴大配制體積。

2.吸取5 μL菌落裂解液I加入PCR管中（如處理樣品量大，建議用8聯排PCR管）。

3.用無菌牙簽或者槍頭刮取適量直徑1-2 mm的酵母菌落懸浮在菌落裂解液I中。

4.吹打或者震蕩混勻后，靜置5 min，即為裂解產物。

5.（可選步驟）于-20 ℃冷凍5 min或置于-80 ℃冰箱速凍10 s。

6.在裂解產物中加入45 μL PCR預混液（已加引物），直接PCR擴增。

注意：

1. 先取3-5個克隆進行預實驗后再進行批量實驗。

2. 培養時間短的樣品，無需冷凍。冷凍完的樣品可直接加入PCR預混液，解凍與否均可。

3. 團狀酵母菌落很難裂解，吹打或者震蕩混勻尤為重要。

4. 如預實驗失敗，將上述第4步得到的裂解產物置于PCR儀98 ℃保溫5 min后，用掌上離心機（8聯排），離心1min 后取上清加入45 μL PCR預混液中，可**提高PCR效率。

菌液樣品

1. 吸取5-10 μL菌液裂解液II加入PCR管中（如處理樣品量大，建議用8聯排PCR管）。

2. 再加入等體積的酵母菌液，震蕩混勻。

3. 于-20 ℃冷凍3 min或置于-80 ℃冰箱速凍10 s后，PCR儀95 ℃保溫2 min。

4. 12,000 rmp離心2 min，取裂解產物（上清），用于PCR擴增。

PCR反應體系:

PCR反應條件：