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一、使用方法:

1.5mL體系：

1. 在含有約100ng質(zhì)粒的1.5mL無菌離心管中，加入5uL預(yù)變性的 Carrier DNA，50uL酵母感受態(tài)細(xì)胞，500uL LiAc/PEG3350混合液輕柔混勻。

2. 30℃水浴30 min，每10 min 混勻一次。

3. 每管加入20 uL DMSO，輕柔混勻。

4. 42℃水浴熱激15 min，每5 min上下顛倒混勻一次。

5. 700 g離心5min。

6. 棄掉上清，用1 ml YPD Plus液體培養(yǎng)基重新懸浮，30℃搖床震蕩培養(yǎng)30-60min。

7. 700 g 離心5min。加入1mL無菌0.9%NaCl重懸菌體。

8. 分別稀釋10倍，100倍后涂布于相應(yīng)的缺陷型培養(yǎng)基上。

9. 30℃恒溫培養(yǎng)3-5天。

15mL體系：

1. 在含有約5-15ug質(zhì)粒的15mL無菌離心管中，加入20uL預(yù)變性的 Carrier DNA，600uL酵母感受態(tài)細(xì)胞，2.5mL LiAc/PEG3350混合液輕柔混勻。

2. 30℃水浴 45 min，每10 min 混勻一次。

3. 每管加入160uL DMSO，輕柔混勻。

4. 42℃水浴熱激20 min，每5 min 上下顛倒混勻一次。

5. 700 g 離心5min。

6. 棄掉上清，用3 ml YPD Plus 液體培養(yǎng)基重新懸浮，30℃搖床震蕩培養(yǎng)90min。

7. 700 g 離心5min。加入15mL無菌0.9%NaCl重懸菌體。

8. 分別稀釋10倍，100倍后涂布于相應(yīng)的缺陷型培養(yǎng)基上。

9. 30℃恒溫培養(yǎng)3-5天。