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儲存溫度：序號1-8常溫保存；序號9需-20℃儲存，藍冰運輸

產品組成：（0.5 L/pouch）

產品說明：

  Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit（酵母單雜培養基套裝YM1010），含有用于Y187-pHis2系統酵母單雜交文庫篩選的全套培養基，性價比更高。培養基以非常方便使用的鋁箔袋形式包裝，每個獨立包裝可以配制0.5 L的培養基。使用時僅需要將袋中的所有干粉倒入三角瓶或培養瓶中，加入0.5 L的ddH2O，然后121 ℃滅菌15 min即可。無需稱量和調整pH值。

  Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit （YM1011）在試劑盒YM1010基礎上增加了100 mL 3-AT溶液（2.5 M，過濾除菌）。

實驗材料：

酵母菌株：Y187（缺陷基因型his3-200、trp1-901、leu2-3）

誘餌載體：pHis2-DNA（篩選標記Trp報告基因His）

文庫載體：pGADT7-cDNA（篩選標記Leu）

實驗步驟：

一、轉化誘餌載體（參考Super轉化試劑盒SK2402質粒轉化步驟）

1. YPDA平板培養劃線，活化Y187酵母菌種；挑酵母菌落于液體YPDA培養基搖菌培養；

2. 制備感受態并將pHis2-DNA轉化進入感受態細胞；

3. SD/-Trp平板檢測轉化結果。

二、自激活檢測

1. 制備不同3-AT濃度梯度的SD/-His/-Trp平板，3-AT的濃度一般設定在50-100 mM之間，并設置不含3-AT的對照；

2. 將上述轉化產物稀釋到單克隆水平（OD值＜0.002），涂板。

3. 篩選出適宜的3-AT濃度。（如某濃度3-AT平板上的菌落弱小且稀疏，與對照相比差距明顯，且延長培養時間也不會再生長，即為理想的3-AT濃度）

三、互作篩選（轉化步驟參考Super轉化試劑盒SK2402文庫轉化步驟）

1. 液體SD/-Trp培養基培養誘餌菌株Y187（pHis2-DNA），制備Y187（pHis2-DNA）感受態細胞；

2. 將pGADT7-cDNA文庫轉入Y187（pHis2-DNA）感受態細胞；

3. 轉化產物涂SD/-Leu、SD/-Trp、SD/-Leu/-Trp平板各一塊，用以計算轉化效率；剩余轉化產物全部涂SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT（X為篩選所得濃度）平板50塊（φ150 mm），培養3-5天；

4. 挑取SD/-His/-Leu/-Trp平板上克隆，PCR后（推薦SK2420，菌P法），測序鑒定；

5. 點對點驗證。

培養基配制方法：

1. 一袋培養基干粉倒入三角瓶或培養瓶中，加0.5 L去離子水中溶解（瓊脂冷水不溶）。

2. 無調整pH值，121 ℃高壓滅菌15 min。

3. 液體培養基封好口避光、室溫儲存備用。

4. 固體培養基冷卻到50 ℃左右倒入平板，室溫凝膠，封口倒置4 ℃保存。

3-AT的使用方法：

1.計算所需平板的數量，配制培養基；

2.設置3-AT的濃度梯度；

3.滅菌篩選培養基，待培養基冷卻到55 ℃左右，按設置濃度加入3-AT母液，搖勻后倒板；

4.標記每個平板的3-AT濃度，超凈臺冷卻凝膠后，將轉化產物涂板，28-30 ℃培養3-5天。