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儲存溫度：序號1-8常溫保存；序號9需-20℃儲存，藍(lán)冰運輸

產(chǎn)品組成：（0.5 L/pouch）

產(chǎn)品說明：

  Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit（酵母單雜培養(yǎng)基套裝YM1010），含有用于Y187-pHis2系統(tǒng)酵母單雜交文庫篩選的全套培養(yǎng)基，性價比更高。培養(yǎng)基以非常方便使用的鋁箔袋形式包裝，每個獨立包裝可以配制0.5 L的培養(yǎng)基。使用時僅需要將袋中的所有干粉倒入三角瓶或培養(yǎng)瓶中，加入0.5 L的ddH2O，然后121 ℃滅菌15 min即可。無需稱量和調(diào)整pH值。

  Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit （YM1011）在試劑盒YM1010基礎(chǔ)上增加了100 mL 3-AT溶液（2.5 M，過濾除菌）。

實驗材料：

酵母菌株：Y187（缺陷基因型his3-200、trp1-901、leu2-3）

誘餌載體：pHis2-DNA（篩選標(biāo)記Trp報告基因His）

文庫載體：pGADT7-cDNA（篩選標(biāo)記Leu）

實驗步驟：

一、轉(zhuǎn)化誘餌載體（參考Super轉(zhuǎn)化試劑盒SK2402質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟）

1. YPDA平板培養(yǎng)劃線，活化Y187酵母菌種；挑酵母菌落于液體YPDA培養(yǎng)基搖菌培養(yǎng)；

2. 制備感受態(tài)并將pHis2-DNA轉(zhuǎn)化進(jìn)入感受態(tài)細(xì)胞；

3. SD/-Trp平板檢測轉(zhuǎn)化結(jié)果。

二、自激活檢測

1. 制備不同3-AT濃度梯度的SD/-His/-Trp平板，3-AT的濃度一般設(shè)定在50-100 mM之間，并設(shè)置不含3-AT的對照；

2. 將上述轉(zhuǎn)化產(chǎn)物稀釋到單克隆水平（OD值＜0.002），涂板。

3. 篩選出適宜的3-AT濃度。（如某濃度3-AT平板上的菌落弱小且稀疏，與對照相比差距明顯，且延長培養(yǎng)時間也不會再生長，即為理想的3-AT濃度）

三、互作篩選（轉(zhuǎn)化步驟參考Super轉(zhuǎn)化試劑盒SK2402文庫轉(zhuǎn)化步驟）

1. 液體SD/-Trp培養(yǎng)基培養(yǎng)誘餌菌株Y187（pHis2-DNA），制備Y187（pHis2-DNA）感受態(tài)細(xì)胞；

2. 將pGADT7-cDNA文庫轉(zhuǎn)入Y187（pHis2-DNA）感受態(tài)細(xì)胞；

3. 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂SD/-Leu、SD/-Trp、SD/-Leu/-Trp平板各一塊，用以計算轉(zhuǎn)化效率；剩余轉(zhuǎn)化產(chǎn)物全部涂SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT（X為篩選所得濃度）平板50塊（φ150 mm），培養(yǎng)3-5天；

4. 挑取SD/-His/-Leu/-Trp平板上克隆，PCR后（推薦SK2420，菌P法），測序鑒定；

5. 點對點驗證。

培養(yǎng)基配制方法：

1. 一袋培養(yǎng)基干粉倒入三角瓶或培養(yǎng)瓶中，加0.5 L去離子水中溶解（瓊脂冷水不溶）。

2. 無調(diào)整pH值，121 ℃高壓滅菌15 min。

3. 液體培養(yǎng)基封好口避光、室溫儲存?zhèn)溆谩?/p>

4. 固體培養(yǎng)基冷卻到50 ℃左右倒入平板，室溫凝膠，封口倒置4 ℃保存。

3-AT的使用方法：

1.計算所需平板的數(shù)量，配制培養(yǎng)基；

2.設(shè)置3-AT的濃度梯度；

3.滅菌篩選培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基冷卻到55 ℃左右，按設(shè)置濃度加入3-AT母液，搖勻后倒板；

4.標(biāo)記每個平板的3-AT濃度，超凈臺冷卻凝膠后，將轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板，28-30 ℃培養(yǎng)3-5天。