抗體偶聯**（ADC）是一類新型的化學藥物，其包含單克隆抗體（mAb），該單克隆抗體可選擇性結合與與細胞藥物性小分子藥物載荷相關的藥物相關抗原。使用可裂解的酶接頭將藥物小分子藥物載荷附著于抗體。為了確定高度**特異性的mAb，功效是抗****以及在循環中穩定但允許快速裂解以在ADC被細胞吸收后釋放細胞殺傷性**的連接物，科學家已經付出了很多努力。已經研究了30多個靶點，并且在臨床開發的各個階段，現在有20多個ADC藥物，包括Trastuzumab-DM1（Roche），SGN-35（Seattle Genetics），HuN901-DM1（ImmunoGen），CR011-vcMMAE（Celidex Therapeutics） ），SAR3419（Sanofi-Aventis），CMC-544（Pfizer），和BIIB015（Biogen Idec）等等。

ADC藥代動力學方法的評估

ADC是一種異質混合物，包含具有不同****載荷的單克隆抗體混合物。由于這種異質性，配體結合測定（LBA）通常用于ADC生物學分析。分析方法使用了多種平臺，包括比色酶聯免疫吸附測定，光測定和基于電化學發光的蛋白分析儀?？偪贵w測定法可用于定量測定結合或不結合**的總抗體。靶向**抗原，抗獨特型mAb，抗人免疫球蛋白（IgG）（Fab'），并且抗人IgG（Fc）抗體可用作捕獲試劑。然后將抗人IgG（Fab'）使用辣根過氧化物酶（HRP）或抗人IgG（Fc）-HRP或具有鏈霉親和素-HRP的生物素化抗人抗體用于檢測（見下圖1）。

為了消除非特異性結合，猴吸附抗人IgG抗體通常用于非人靈長類動物研究。取決于接頭的類型，**結合的位置可位于（Fab'）或載體抗體的鉸鏈區上。**結合的化學計量可能會影響ADC捕獲或檢測試劑的結合，并顯著影響測定性能。而且，即使結合位點沒有被直接阻斷，某些測定形式對**負荷也很敏感。據報道，不同的測定形式會產生不同的藥代動力學（PK），并顯著影響關鍵PK參數的計算，例如清除率和**暴露。似乎大多數測定形式對**負荷非常敏感。

對于綴合的抗體LBA，將抗細胞*性**抗體用作捕捉劑或檢測劑，并與上文概述的捕捉劑和檢測劑配對，以測量綴合至少一種**的抗體（參見下圖2）。

結合抗體測定法的優點在于它們能夠量化循環中ADCs可能造成的**逐步損失。但是，使用抗**抗體進行檢測時應格外小心，因為用于檢測的ADC標準材料相比，ADC的體內載藥量可能會發生變化。

ADC的成功設計是在循環中高**連接物的穩定性與**的**內細胞*性**釋放的結合。循環中從載體抗體中非特異性釋放**仍然是決定ADC半衰期的關鍵因素。為了測量已從載體抗體釋放的**部分（即游離**），可以將競爭性LBA包被用于捕獲的抗藥抗體和恒定濃度的HRP-**一起用作報告基因（參見下圖3）。

因為從ADC釋放的游離**的清除速度比ADC自身的清除速度快得多，所以可能無法檢測到游離**。為了解決這個問題，可以測量與ADC結合的剩余**。通過使用組織蛋白酶B消化釋放先前與載體抗體結合的**，然后通過競爭性LBA分析或LC-MS定量游離**來實現此測量。

理想情況下，應在ADC開發和表征的早期階段開發用于非臨床PK生物學分析的測定方法。與平均DAR標準相比，可以通過測定富集或純化的**抗體比率（DAR）分數的回收率來進行分析評估，以確保不同的分析形式均等地回收**。如果無法進行此分析，則對于生物分析方法的設計，ADC的作用機理，靶向的**抗原，接頭的類型，**抗體比率，細胞*性**等的詳細信息是必需的。除了LBA方法外，親水相互作用色譜（HILIC），HPLC和LC-MS還用于定量ADC。