凝集素的熒光標(biāo)記（Cyanine染料、熒光素FITC）
凝集素可作為組織化學(xué)的特異性探針廣泛用于光鏡的石蠟切片和冰凍切片、電鏡樹脂包埋超薄切片及冰凍超薄切片等標(biāo)本的觀察。為使結(jié)合在細(xì)胞膜上單糖的凝集素呈現(xiàn)可視性。目前已有熒光素異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)、辣根過氧化物酶和生物素、鐵蛋白、膠體金標(biāo)記凝集素的組織化學(xué)染色。

橙黃網(wǎng)胞盤菌凝集素(AAL)是兩個(gè)相同亞單位的二聚體,每個(gè)亞單位約36kDa。與歐洲烏賊和蓮藕四角葉凝集素偏好(α-1,2)連接的巖藻糖殘基不同,枳實(shí)凝集素優(yōu)先與巖藻糖連接(α-1,6)到N-乙酰葡萄糖胺或巖藻糖連接(α-1,3)到N-乙酰乳糖胺相關(guān)結(jié)構(gòu)結(jié)合。AAL還可逆地結(jié)合巖藻糖與核酸

熒光素標(biāo)記的*凝集素具有適當(dāng)數(shù)量的熒光色素,為該凝集素提供*的染色特性。這種共軛物基本上不含未結(jié)合的熒光色素。激發(fā)峰值為495 nm,發(fā)射峰值為515 nm。

FITC標(biāo)記凝集素的組織化學(xué)染色程序

1．組織切片經(jīng)脫蠟處理，若是Bouin液固定的組織，用70％乙醇洗3次除去組織切片內(nèi)的黃色后，再用蒸餾水漂洗；

2．PBS漂洗(含1％牛血清白蛋白)2次，每次5分鐘；

3．加入FITC-凝集素(PBS適當(dāng)*釋)，置濕盒內(nèi)孵育，室溫1小時(shí)；

4．PBS漂洗3次，每次5分鐘；

5．水溶性封片劑封片，熒光顯微鏡觀察。

6．結(jié)果 FITC標(biāo)記的凝集素能直接與組織細(xì)胞內(nèi)的糖基結(jié)合，從而顯示糖基的位置，可用于檢測(cè)組織細(xì)胞中的糖成分，陽性部位呈黃綠色熒光。

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