核苷酸糖轉運體(NSTs)是ER和高爾基族的溶質載體35 (SLC35)家族成員，通過將腔內單磷酸核苷酸交換為胞質核苷酸糖，為糖基化提供底物。NSTs缺陷已被證實與先天性糖基化(CDG)疾病有關，然而，許多類型CDG的分子基礎仍不明確。為了更好地理解NSTs的生物學特性，我們確定了udp -半乳糖轉運體(SLC35A2)、udp - n -乙酰氨基葡萄糖轉運體(SLC35A3)和一個孤兒核苷酸糖轉運體SLC35A4的潛在相互作用伙伴。

為此，我們將每個SLC35A2-A4蛋白作為誘餌進行了四個獨立的下拉實驗，并用質譜技術鑒定了免疫沉淀物質。從獲得的候選名單中，我們選擇了一些使用納米比特系統(一種基于熒光素的分離發光技術)在體外確認相互作用的候選名單。NSTs與兩種atp酶(ATP2A2、ATP2C1)、高爾基pH調節因子B (GPR89B)和鈣通道(TMCO1)相互作用，這可能反映了離子穩態對糖基化的調節作用，并與basigin (BSG)相互作用。

我們的發現為NST相互作用網絡的發現提供了一個起點，以便更好地理解糖基化是如何被調節并與其他細胞過程相聯系的。意義:盡管核苷酸糖轉運體是蛋白質糖基化機制的關鍵組成部分，并且其缺乏活性是嚴重的代謝性疾病的基礎，但這些必需蛋白質的生物學、功能和調節仍是謎。

在本研究中，我們通過識別一組新的潛在的相互作用伙伴，用于udp -半乳糖轉運體(SLC35A2)、udp - n -乙酰氨基葡萄糖轉運體(SLC35A3)和一個孤兒轉運體SLC35A4，但其作用尚未確定。其中幾個新的相互作用通過NanoBiT系統在體外得到證實，這是一種分裂熒光素酶互補實驗。這項工作的意義還在于，它通過對4種不同的共免疫沉淀策略的詳細比較，以及定制的樣品制備和數據處理工作流程，解決了發現膜蛋白相互作用伙伴的總體挑戰。

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