udp - l -鼠李糖(udp - l -rha)是植物合成含鼠李糖化合物的重要供糖體。在植物中,參與UDP-Rha生物合成的酶及其編碼基因卻很少。
通過RNA-Seq序列分析,從尾突鳥(Ornithogalum caudatum)中分離到兩個編碼鼠李糖合成酶(RhS)和雙功能的udp -4-keto-6-脫氧葡萄糖(UDP-4K6DG) 3,5 -異丙基酶/ udp -4-keto- l -鼠李糖(UDP-4KR) 4-keto-reductase (UER)的基因。
OcRhS1基因有一個2019 bp的開放閱讀框(ORF),編碼一種三功能的RhS酶。
體外酶學(xué)檢測表明,OcRhS1可以通過三個連續(xù)反應(yīng)將UDP-D-glucose (UDP-Glc)轉(zhuǎn)化為UDP-Rha。
生物化學(xué)證據(jù)表明,重組蛋白OcRhS1在pH范圍5-11和溫度范圍0-60℃時均具有活性。
UDP-Glc中OcRhS1的Km值為1.52 × 10?4 M. OcRhS1是一個多結(jié)構(gòu)域蛋白,具有兩組輔因子結(jié)合基序。對OcRhS1的輔因子依賴性特性進行了表征。觀察到OcRhS1的n端部分(OcRhS1- n)代謝UDP-Glc,形成中間體UDP-4K6DG。
OcUER1含有一個906 bp的ORF,編碼一個301 aa的多肽。OcUER1與OcRhS1的羧基末端結(jié)構(gòu)域(OcRhS1- c)具有很高的相似性,表明其具有將UDP-4K6DG轉(zhuǎn)化為UDP-Rha的內(nèi)在能力。
在OcRhS1-N和OcUER1的共同作用下,UDP-Glc可以被生物轉(zhuǎn)化為UDP-Rha。后來的生化化驗證實了這一說法。OcRhS1和OcUER1的表達譜揭示了它們可能參與了尾狀葉中含鼠李糖多糖的生物合成。
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