UDP糖|用液相色譜法測定長花百合花粉中部分純化糖激酶(glucuronkinase)的非放射性酶
重組的udp -糖焦磷酸化酶,該酶具有廣泛底物特異性,來自豌豆(Pisum satium, PsUSP)或擬南芥(Arabidopsis thaliana, AtUSP)作為偶聯酶。葡萄糖醛酸激酶經deae -瓊脂糖柱部分純化。
通過非放射性偶聯酶試驗測定激酶活性,在該反應中產生的葡萄糖醛酸-1-磷酸被udp -糖焦磷酸化酶使用,并進一步轉化為udp -葡萄糖醛酸。
該udp -糖,以及不同的副產物,用**液相色譜法檢測,采用強陰離子交換柱或反相C18柱,波長為260 nm。由于USP具有廣泛的底物特異性,該方法適用于不同的激酶和糖。
**液相色譜法是高度敏感的,允許在pmol min-1范圍內測量激酶活性。
此外,它可以用于純激酶以及粗或部分純化的酶溶液的測定,而沒有任何atp酶或NADH氧化酶的干擾背景,這在不同的光度測定中會引起麻煩。
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