UDP 糖|根據FuncLib突變NGT以獨特的糖為底物生產微均相糖肽 ?
n -糖基化是蛋白質翻譯后最重要的修飾之一。
細菌中存在胞質可溶性n -糖基轉移酶(Cytoplasmic soluble N-glycosyltransferase, NGT),它能將不同的單糖從糖核苷酸轉移到多肽的NXS/T(X≠Pro)共識序列上。
目前報道的NGT酶可以將多種不同的糖轉移到蛋白質中,這將導致糖鏈的異質性以及糖肽類結構和功能的復雜性和不穩定性。
根據FuncLib算法,我們從ApNGT中獲得了底物特異性更高的突變體ApNGT- p1 (the NGT from actinobacterus pleuropneumae)。
與野生型ApNGT相比,突變型ApNGT- p1只能利用UDP-Glc作為糖供體。ApNGT-P1的**溫度為40℃左右,PBS緩沖液的**pH為7.5-8.0。ApNGT-P1對K+、Mn2+、Ca2+和Mg2+具有較好的耐受性,但受到Na+、Cu2+和Zn2+的強烈**。
該突變體可用于**生產糖基化多肽或糖基化位點具有均勻葡萄糖的蛋白質。
此外,本工作為進一步研究提高ngt供體基質選擇性提供了可行的途徑。
UDP-L-RhaNAc | UDP-4n-D-FucNAc |
UDP-D-XylNAc | UDP-VioNAc |
UDP-2-Biotinyl-GalNAc | UDP-6-Biotinyl-GalNAc |
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