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UDP 糖|根據FuncLib突變NGT以獨特的糖為底物生產微均相糖肽 ?
發布時間:2022-01-04     作者:UDP 糖   分享到:

n -糖基化是蛋白質翻譯后最重要的修飾之一。

細菌中存在胞質可溶性n -糖基轉移酶(Cytoplasmic soluble N-glycosyltransferase, NGT),它能將不同的單糖從糖核苷酸轉移到多肽的NXS/T(X≠Pro)共識序列上。

目前報道的NGT酶可以將多種不同的糖轉移到蛋白質中,這將導致糖鏈的異質性以及糖肽類結構和功能的復雜性和不穩定性。

根據FuncLib算法,我們從ApNGT中獲得了底物特異性更高的突變體ApNGT- p1 (the NGT from actinobacterus pleuropneumae)。

與野生型ApNGT相比,突變型ApNGT- p1只能利用UDP-Glc作為糖供體。ApNGT-P1的**溫度為40℃左右,PBS緩沖液的**pH為7.5-8.0。ApNGT-P1對K+、Mn2+、Ca2+和Mg2+具有較好的耐受性,但受到Na+、Cu2+和Zn2+的強烈**。

該突變體可用于**生產糖基化多肽或糖基化位點具有均勻葡萄糖的蛋白質。

此外,本工作為進一步研究提高ngt供體基質選擇性提供了可行的途徑。


UDP-L-RhaNAcUDP-4n-D-FucNAc
UDP-D-XylNAcUDP-VioNAc
UDP-2-Biotinyl-GalNAcUDP-6-Biotinyl-GalNAc


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