介紹量子點表面修飾抗體IgG、IgM、IgA、IgE、IgD抗體
免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)是廣泛存在于哺乳動物血清、淋巴液、組織液和外分泌液中的一種具有抗體活性或化學結構與抗體相似的球蛋白,在機體防御疾病的重要成分在疾病研究、**研發、疫苗評價中具有重要作用。抗體(Antibody,Ab)是B細胞接受抗原刺激后分泌的具有免疫功能的,即能與抗原特異性結合的免疫球蛋白。因此所有的抗體都是免疫球蛋白,而免疫球蛋白并不都是抗體。Ig分子由兩條相同的輕鏈(L鏈)和兩條相同的重鏈(H鏈)所組成,L鏈與H鏈由二硫鍵連接形成一個四肽鏈分子,稱為Ig分子的單體,是構成免疫球蛋白分子的基本結構。根據H鏈恒定區結構的不同將免疫球蛋白分為五種:IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。
量子點表面修飾分子偶聯服務
1、量子點表面修飾**小分子根據客戶需求將油溶性或水溶性**分子負載到量子點表面,如阿霉素、紫杉醇等。
2、量子點表面修飾功能性小分子:
在已有在售產品的基礎上,可根據客戶需求將生物靶向性小分子,如RGD、葉酸等,偶聯到量子點表面,構建靶向納米探針。
3、量子點表面修飾抗體
在已有在售產品的基礎上,可根據客戶需求將生物靶向性抗體等蛋白分子,如美羅華單抗(針對CD20)、西妥昔單抗(針對EGFR)、曲妥珠單抗(針對HER2)等,偶聯到量子點表面,構建靶向納米探針。
2、量子點表面修飾糖類小分子:
3、在已有在售產品的基礎上,可根據客戶需求將糖類小分子,如半乳糖、葡萄糖等,偶聯到量子點表面,構建靶向納米探針。
針對目前量子點抗體偶聯物純化工藝復雜,回收率低,難以實現規模化生產的弊端,本**通過采用氨基葡萄糖封閉量子點與抗體偶聯物的殘留羧基,降低偶聯產物的表面ζ電位,通過調整溶液pH值至4.5~5.0,進一步降低偶聯產物在溶液中的凈電荷含量、實現普通高速離心法規模化**純化量子點與抗體偶聯物。本**簡化了量子點與抗體偶聯物的實驗操作流程,降低了對分離設備的要求,適合大批量純化量子點IgG類單克隆抗體偶聯物,得率在85%以上,且偶聯產物的熒光特性以及生物活性未見明顯變化
抗微生物納米顆粒用于遞送**劑或光響應性載體提供了抵抗傳染病的新方法。在各種納米顆粒中,熒光碳點由于獨特的光學性能受到廣泛關注。例如,熒光碳點可以作為大腸桿菌細菌成像的**熒光探針。兩親性熒光碳點和聚乙二醇修飾的熒光碳點在細菌檢測和成像熒光標記方面也很有潛力。季銨鹽和支化聚乙烯亞胺修飾的熒光碳點對革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細菌都具有良好的抗菌活性
大量的單克隆抗體被成功制備,并被廣泛應用于免疫學、生物化學、藥理學、細胞生物學、微生物學及臨床等各個領域。
因此,鼠源性IgG類單克隆抗體自然而然地成為了一類**且應用**廣泛的單克隆抗體。該類抗體不僅具有重要的科研價值,而且具有巨大的商業價值。然而,鼠源性IgG類單克隆抗體不具有類似納米材料的光、電等性質,因此在實際應用中往往需要結合其他的一些材料,如熒光物質、有機染料,磁性材料等。
量子點(Quantum Dots, QDs)是一種由I1-VI或II1-V族元素組成的半導體納米晶體(Semiconductor nanocrystals),由于量子點的**物理尺寸,從而導致了一種量子限域效應,使得量子點顯示出具有比常規有機染料、熒光蛋白更為優越的獨特光學性質。**,與常規有機染料相比,量子點的激發光譜寬且呈連續分布,其熒光發射光譜的半寬峰高與常規有機染料相比更窄,且呈對稱分布。此外,量子點與常規熒光染料相比,激發和發射光譜之間的斯托克斯位移大,降低了量子點熒光信號的信噪比,大大提高了量子點的檢測靈敏度。單個量子點的熒光強度是羅丹明染料的10-100倍之間,且量子點的熒光發射波長可通過調整量子點合成粒徑的大小以及材料組分進行連續調諧,因此合成不同直徑大小的量子點就能獲得多種可以辨別的不同顏色熒光。由于不同尺寸大小的量子點能夠采用單一波長的激發光產生不同顏色的熒光,因而可方便實現對生物組分的多元檢測。量子點與常規有機染料或熒光蛋白相比,具有較強的抗光漂白功能。量子點在連續光激發條件下,其熒光發射強度隨時間變化不明顯,而Alexa 488在沒有添加抗漂白劑的情況下熒光強度呈指數下降。總之,作為一種新型的熒光標記物,量子點具有比常規有機染料以及熒光蛋白更為**的優勢,目前已廣泛應用于細胞標記、活體細胞成像、活體動物體內熒光顯微成像以及熒光標記的免疫學快速診斷技術等領域。其中羧基功能團表面的水溶性量子點應用**廣泛,采用多羧基以及疏水鏈的兩性聚合物是油溶性量子點轉化為羧基表面的水溶性量子點最常用方法。然而,量子點并不具有抗體分子的特異性和選擇性,因此往往需要在其表面偶聯上抗體分子形成量子點單克隆抗體偶聯物。這樣,這種偶聯物就同時擁有了量子點的光學特性和抗體分子的特異性和選擇性。
水溶性羧基化量子點與IgG類單克隆抗體常用偶聯方法為EDC/NHSS介導的活潑酯方法。在水溶性羧基化量子點與IgG類單克隆抗體偶聯過程中,將量子點IgG類單克隆抗體偶聯物與溶液中游離IgG類單克隆抗體進行**分離,是保證量子點IgG類單克隆抗體偶聯物廣泛使用的前提。目前,量子點單克隆抗體偶聯物純化方法主要包括以下幾種。
**,超速離心方法。由于·水溶性量子點納米粒子粒徑小,比表面積大,納米材料與單克隆抗體偶聯物表面含有大量的羧基,因此采用常規離心(低于30,000 g離心力),量子點單克隆抗體偶聯物回收效率普遍偏低(小于50%),若要將量子點單克隆抗體偶聯物回收效率提高至85%以上,離心速度一般需大于50,000 g。
**種,凝膠色譜法。該方法利用量子點單克隆抗體偶聯物與單克隆抗體的分子量差異(表現為光學以及水化粒徑的差異),利用排阻層析原理進行分離。
第三種,超濾分離法。該法利用超濾管的超濾膜截流分子量差異將單克隆抗體與量子點單克隆抗體偶聯物進行分離的一種方法。同時還有基于瓊脂糖凝膠以及瓊脂糖-聚丙烯酰胺雜合凝膠電泳等的純化分離方法。總之,利用以上純化方法雖然可以獲得較**的量子點單克隆抗體偶聯物,但仍存在操作條件苛刻,流程復雜,得率低等缺陷,很難實現規模化生產。
水溶性量子點是一種良好的納米熒光標記材料,該材料通過與單克隆抗體、鏈霉親和素、蛋白A、蛋白G以及配體或受體分子偶聯,可廣泛應用于細胞標記、活體細胞成像、活體動物體內熒光顯微成像以及免疫快速診斷等諸多領域。但是傳統的量子點單克隆抗體偶聯物純化方法存在操作條件苛刻,流程復雜,得率低以及很難實現規模化生產等缺陷。
[0006]本**的目的是提供一種操作簡便、分離效率高、大批量純化水溶性量子點IgG類單克隆抗體的新方法,具體包括以下步驟:
純化量子點與IgG類單克隆抗體偶聯物的方法,包括如下步驟:
(I)將水溶性羧基修飾的量子點活化,加入IgG類單克隆抗體溶液,調整溶液pH至7.0~9.0后,偶聯反應;
(2)偶聯反應結束后,溶液中加入氨基葡萄糖封閉偶聯產物中量子點表面殘留的羧基,將反應溶液PH值調整至弱酸性;
(3)高速離心,棄上清液,取沉淀。
步驟(3)后,還有將沉淀用含25%甘油,0.01% NaN3的0.05 mol/L pH 7.0~7.5
磷酸鹽緩沖液溶解步驟。
所用量子點為羧基化兩親聚合物修飾的水溶性羧基量子點。
所述步驟(1)中活化為將水溶性羧基修飾的量子點溶解于pH 5.0~6.0,0.05mol/L硼酸鹽緩沖液中,分別加入1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺以及N-羥基硫代琥珀酰亞胺,37°C反應2小時,活化量子點羧基。
1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺以及N-羥基硫代琥珀酰亞胺與量子點的摩爾比均為100~200:1,優選為150:1 ;所述IgG類單克隆抗體與量子點的摩爾比為I~10:1 ;
偶聯反應結束后,溶液中加入氨基葡萄糖至氨基葡萄糖終濃度為1.5~3%,充分混勻15~30分鐘;
步驟(2)中將反應溶液pH值調整至弱酸性為將pH值調整至4.5~5.0,優選為4.5 ; 步驟(3)所述高速離心離心力為28,000~30,000g。
所述IgG類單克隆抗體為抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體、抗赭曲霉毒素單克隆抗體、抗玉米赤霉烯酮單克隆抗體、抗恩諾沙星單克隆抗體、抗鹽酸克倫特羅單克隆抗體、抗沙丁胺醇單克隆抗體、抗孔雀石綠單克隆抗體、抗萊克多巴胺單克隆抗體、抗沙門氏菌單克隆抗體、抗志賀氏菌單克隆抗體、或抗空腸彎曲菌單克隆抗體。
量子點修飾人源化單克隆抗體
二硫化鉬單層量子點溶液
產品名稱
中文名稱: MoS2單層量子點溶液
英文名稱: Single layer MoS2 quantum dots
性質
濃度: 0.5 mg/ml
粒徑:小于10nm
溶劑:水
穩定劑:氫氧化鋰
PH: 8-9
制備方法
MoS2量子點由鋰插層方法制備,制備后期離心去除大片徑二硫化鉬,量子點為主要成分,可能殘留部分納米片。插層法制備的量子點不發光,但是因為具有大量的缺陷和比表面積,是電化學應用的材料。
應用領域
傳感檢測、光電器件、醫藥領域、潤滑添加劑等。
保存條件
二硫化鉬量子點溶液請于4℃冷藏保存,需惰性氣體保護,并于開封一周內用完。二硫化鉬量子點粉末請于常溫干燥避光密封保存。
制備二硫化鉬量子點的方法包括機械剝離法(如研磨法)、化學合成法、化學氣象層積、激光消融、電子束刻蝕方法等
制備步驟:
一種二硫化鉬量子點的制備方法,包括以下步驟:(1)將二硫化鉬粉末分散在無水乙醇中;向該溶液中加入氫氧化鈉,氫氧化鈉加入量為0.5-3mg/ml,超聲混勻后得到混合溶液;(2)將步驟(1)所述混合溶液轉移至反應釜中,密封,在100-200℃烘箱內反應3-24h,自然冷卻至室溫,過濾后收集所得濾液;(3)將步驟(2)所得濾液在透析袋中透析至中性,去除雜質小分子,干燥后即得到二硫化鉬量子點,該二硫化鉬量子點隨著激發光波長的不同,二硫化鉬量子點的發射光波長也不同,其中**激發波長為370nm,此時的**熒光發射波長為461nm,屬于可見光范圍。該操作簡單,綠色環保,成本低,工藝條件易于實現,所制備的二硫化鉬量子點具有優良的分散性、水溶性和強的熒光性。在光電子器件、鋰離子電池、生物成像、光電催化等方面具有潛在的應用價值。但是反應過程中需要氫氧化鈉可以同時作為一種腐蝕、插層、剝離試劑,在腐蝕大尺寸二硫化鉬表面的同時,插入其層與層之間,得到小尺寸二硫化鉬量子點。但是氫氧化鈉對環境污染比較大,并且需要采用聚四氟乙烯內襯反應釜反應,不利于大規模生產,并且生產要求高。
溫馨提示:西安齊岳生物科技有限公司供應的產品僅用于科研,不能用于人體和其他商業用途(ssl2021.11.11)
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