FITC-ADP,FITC-二磷酸腺苷,ADP-FITC異硫氰酸熒光素的合成步驟
FITC-ADP(Fluorescein isothiocyanate–adenosine diphosphate)是一種將異硫氰酸熒光素(FITC)標記至腺苷二磷酸(ADP)上的熒光核苷酸衍生物,常用于研究核苷酸受體、酶活性和細胞信號轉導等生物過程。該合成通常依賴于FITC與ADP分子中可反應的胺基之間形成穩定的硫脲鍵。
合成步驟如下:
原料準備:使用高純度的ADP二鈉鹽和FITC(常用5-或6-異構體),反應在無水環境中進行以避免核苷酸降解。ADP在結構上具有一個初級胺基來自腺嘌呤的6-氨基位點,可作為與FITC反應的位點。
緩沖液溶解:將ADP溶解于碳酸氫鈉緩沖液(pH 8.5),這一堿性環境有助于提高胺基的親核性。FITC溶于少量無水DMSO或DMF,以確保其活性。
偶聯反應:將FITC溶液逐滴加入ADP溶液中,在避光條件下于室溫或4°C輕微攪拌反應數小時至過夜。反應期間,FITC的異硫氰酸基團與ADP的胺基反應,形成穩定的硫脲鍵,構建熒光標記的核苷酸。
純化:反應完成后,使用反相高效液相色譜(HPLC)進行分離,洗脫并收集FITC-ADP產物。其他方法如透析、凝膠過濾層析也可用于除去游離FITC與未反應ADP。
驗證:通過紫外-可見吸收光譜(UV-Vis)和熒光光譜確認產物具有典型的FITC吸收(約495 nm)和發射波長(約520 nm)。同時可采用質譜(如ESI-MS)驗證分子量,進一步確認結合位點。
終產物FITC-ADP是一種親水性、熒光性核苷酸衍生物,適合用于體外和細胞環境中的生物分子標記和探針構建。
產品名稱:FITC-ADP,FITC-二磷酸腺苷
純度:95%+
性狀:基于不同的分子量,呈白色 / 類白色固體,或液體。
溶劑:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常規有機溶劑。
儲藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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僅供科研,不能用于人體實驗AXC.2025.06.23