FITC-LPS
FITC標記脂多糖用于TLR4受體識別與內吞作用研究
一、產品概述
產品名稱:FITC-LPS(熒光素標記脂多糖)
英文名稱:FITC-labeled Lipopolysaccharide
別名:Fluorescein Isothiocyanate-LPS;熒光標記脂多糖
常見來源:大腸桿菌(E. coli O55:B5、O111:B4、O26:B6 等)
分子量:>10,000 Da(天然LPS為高分子雜多糖,分子量不定)
純度:≥95%(脫蛋白)
熒光激發/發射波長:Ex 495 nm / Em 520 nm
外觀:淡黃綠色至黃綠色凍干粉末或溶液
溶解性:可溶于PBS、H?O、DMSO、緩沖液等
儲存條件:-20°C避光干燥保存(推薦避光分裝)
保質期:12個月(未開封)
二、產品結構與理化性質
1. LPS結構簡介
脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成部分,由三部分構成:
脂A(Lipid A):LPS的疏水部分,負責激活Toll樣受體(TLR4);
核心多糖(Core oligosaccharide):連接脂A與O原;
O-特異性原(O-antigen):重復單位組成的長鏈多糖,決定菌株的特異性。
2. FITC標記原理
FITC(Fluorescein isothiocyanate)通過異硫氰酸基(–N=C=S)與LPS中的伯胺類基團(主要來源于修飾的核心糖或微量蛋白)發生共價反應,形成穩定的硫脲結構,實現熒光標記。標記后LPS保留免疫活性和細胞識別功能,同時具備強烈綠色熒光。
3. 熒光性能
激發波長:495 nm
發射波長:520 nm
適用檢測儀器:熒光顯微鏡、激光共聚焦、流式細胞儀、板式讀數儀等。
三、合成與質量控制
1. 合成步驟簡述
將高純度LPS溶于堿性緩沖液(如碳酸氫鈉緩沖液);
將FITC溶于DMSO,緩慢加入LPS溶液中;
室溫反應 2~4 小時,避光;
采用透析袋(MWCO ~3.5 kDa)或凝膠層析去除未結合的FITC;
冷凍干燥,終得粉末狀FITC-LPS。
2. 質控指標
FITC結合度:一般為0.5–2 mol FITC/mol LPS;
熒光強度:確保高信噪比;
LPS活性檢測:保留對TLR4的激活能力(可通過細胞實驗或HEK-Blue? hTLR4系統檢測);
無蛋白殘留:采用蛋白酶和凝膠色譜去除污染。
四、應用方向
1. 免疫學研究
FITC-LPS常被用于研究LPS介導的免疫應答,如:
TLR4介導的先天免疫激活;
單核細胞、巨噬細胞的識別與激活;
炎癥因子(如IL-6、TNF-α)釋放研究;
細胞因子表達分析;
體內外炎癥模型構建。
2. 細胞攝取與定位
通過FITC標記,可追蹤LPS的攝取、胞內運輸與分布:
巨噬細胞攝取動力學研究;
內吞通路與胞內運輸分析(如與溶酶體共定位);
LPS與膜蛋白/受體的結合行為觀察;
可與DAPI、LysoTracker等染料共染成像。
3. 流式細胞術分析
FITC-LPS可用于:
分析LPS與細胞表面或胞內受體結合情況;
測定不同細胞類型對LPS的響應程度;
鑒別高攝取亞群;
研究LPS競爭性抑制或中和體活性。
4. 納米遞送系統的模型分子
由于LPS分子大、復雜且結構穩定,FITC-LPS常用于:
熒光示蹤LPS包裹或共價修飾的納米顆粒;
構建LPS仿生膜模型;
研究LPS在遞送系統中釋放機制與靶向能力。
五、使用方法與建議
1. 溶解方法
推薦緩慢加入無菌PBS緩沖液(pH 7.4)中,輕微渦旋;
可用37°C水浴短暫加熱以助溶;
避免劇烈震蕩,防止分子解聚。
2. 工作濃度建議
實驗類型 推薦濃度
免疫刺激(細胞) 10–100 ng/mL
成像實驗 1–10 μg/mL
流式細胞術 0.1–5 μg/mL
3. 保存與分裝
建議溶液分裝儲存在-20°C,避光;
避免反復凍融,使用低吸附EP管;
粉末狀態可保存12個月,溶液建議1個月內用完。
六、注意事項
FITC對光敏感,操作過程中需避免強光照射;
部分細胞系對LPS特別敏感,需預實驗確定濃度;
不同菌株來源的LPS免疫原性不同,選擇應根據實驗需求;
如用于動物實驗,請注意其致熱性和炎癥反應強度;
FITC可能干擾LPS結構或功能,務必驗證其生物活性是否保留。
七、包裝信息
包裝規格 貨號示例 儲存溫度 形態
100 μg FITC-LPS-100 -20°C 凍干粉
500 μg FITC-LPS-500 -20°C 凍干粉
1 mg FITC-LPS-1MG -20°C 凍干粉或水溶液
定制規格 可定制菌株/濃度 -20°C 客戶指定
可根據客戶需求提供不同菌株來源(E. coli O55:B5, O111:B4 等)或不同FITC標記密度的產品。
八、相關產品推薦
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廠家:西安齊岳生物科技有限公司
用途:科研
狀態:固體/粉末/溶液
產地:西安
溫馨提醒:僅供科研,不能用于人體實驗!
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