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FITC-LPS,FITC標記脂多糖,用于TLR4受體識別與內吞作用研究
發布時間:2025-07-18     作者:ssl   分享到:

FITC-LPS

FITC標記脂多糖用于TLR4受體識別與內吞作用研究

一、產品概述

產品名稱:FITC-LPS(熒光素標記脂多糖)

英文名稱:FITC-labeled Lipopolysaccharide

別名:Fluorescein Isothiocyanate-LPS;熒光標記脂多糖

常見來源:大腸桿菌(E. coli O55:B5、O111:B4、O26:B6 等)

分子量:>10,000 Da(天然LPS為高分子雜多糖,分子量不定)

純度:≥95%(脫蛋白)

熒光激發/發射波長:Ex 495 nm / Em 520 nm

外觀:淡黃綠色至黃綠色凍干粉末或溶液

溶解性:可溶于PBS、H?O、DMSO、緩沖液等

儲存條件:-20°C避光干燥保存(推薦避光分裝)

保質期:12個月(未開封)

二、產品結構與理化性質

1. LPS結構簡介

脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成部分,由三部分構成:

脂A(Lipid A):LPS的疏水部分,負責激活Toll樣受體(TLR4);

核心多糖(Core oligosaccharide):連接脂A與O原;

O-特異性原(O-antigen):重復單位組成的長鏈多糖,決定菌株的特異性。

2. FITC標記原理

FITC(Fluorescein isothiocyanate)通過異硫氰酸基(–N=C=S)與LPS中的伯胺類基團(主要來源于修飾的核心糖或微量蛋白)發生共價反應,形成穩定的硫脲結構,實現熒光標記。標記后LPS保留免疫活性和細胞識別功能,同時具備強烈綠色熒光。

3. 熒光性能

激發波長:495 nm

發射波長:520 nm

適用檢測儀器:熒光顯微鏡、激光共聚焦、流式細胞儀、板式讀數儀等。

FITC-LPS,FITC標記脂多糖

三、合成與質量控制

1. 合成步驟簡述

將高純度LPS溶于堿性緩沖液(如碳酸氫鈉緩沖液);

將FITC溶于DMSO,緩慢加入LPS溶液中;

室溫反應 2~4 小時,避光;

采用透析袋(MWCO ~3.5 kDa)或凝膠層析去除未結合的FITC;

冷凍干燥,終得粉末狀FITC-LPS。

2. 質控指標

FITC結合度:一般為0.5–2 mol FITC/mol LPS;

熒光強度:確保高信噪比;

LPS活性檢測:保留對TLR4的激活能力(可通過細胞實驗或HEK-Blue? hTLR4系統檢測);

無蛋白殘留:采用蛋白酶和凝膠色譜去除污染。

四、應用方向

1. 免疫學研究

FITC-LPS常被用于研究LPS介導的免疫應答,如:

TLR4介導的先天免疫激活;

單核細胞、巨噬細胞的識別與激活;

炎癥因子(如IL-6、TNF-α)釋放研究;

細胞因子表達分析;

體內外炎癥模型構建。

2. 細胞攝取與定位

通過FITC標記,可追蹤LPS的攝取、胞內運輸與分布:

巨噬細胞攝取動力學研究;

內吞通路與胞內運輸分析(如與溶酶體共定位);

LPS與膜蛋白/受體的結合行為觀察;

可與DAPI、LysoTracker等染料共染成像。

3. 流式細胞術分析

FITC-LPS可用于:

分析LPS與細胞表面或胞內受體結合情況;

測定不同細胞類型對LPS的響應程度;

鑒別高攝取亞群;

研究LPS競爭性抑制或中和體活性。

4. 納米遞送系統的模型分子

由于LPS分子大、復雜且結構穩定,FITC-LPS常用于:

熒光示蹤LPS包裹或共價修飾的納米顆粒;

構建LPS仿生膜模型;

研究LPS在遞送系統中釋放機制與靶向能力。

五、使用方法與建議

1. 溶解方法

推薦緩慢加入無菌PBS緩沖液(pH 7.4)中,輕微渦旋;

可用37°C水浴短暫加熱以助溶;

避免劇烈震蕩,防止分子解聚。

2. 工作濃度建議

實驗類型 推薦濃度

免疫刺激(細胞) 10–100 ng/mL

成像實驗 1–10 μg/mL

流式細胞術 0.1–5 μg/mL

3. 保存與分裝

建議溶液分裝儲存在-20°C,避光;

避免反復凍融,使用低吸附EP管;

粉末狀態可保存12個月,溶液建議1個月內用完。

六、注意事項

FITC對光敏感,操作過程中需避免強光照射;

部分細胞系對LPS特別敏感,需預實驗確定濃度;

不同菌株來源的LPS免疫原性不同,選擇應根據實驗需求;

如用于動物實驗,請注意其致熱性和炎癥反應強度;

FITC可能干擾LPS結構或功能,務必驗證其生物活性是否保留。

七、包裝信息

包裝規格 貨號示例 儲存溫度 形態

100 μg FITC-LPS-100 -20°C 凍干粉

500 μg FITC-LPS-500 -20°C 凍干粉

1 mg FITC-LPS-1MG -20°C 凍干粉或水溶液

定制規格 可定制菌株/濃度 -20°C 客戶指定

可根據客戶需求提供不同菌株來源(E. coli O55:B5, O111:B4 等)或不同FITC標記密度的產品。

八、相關產品推薦

FITC-LTA(脂磷壁酸):用于革蘭陽性菌成分標記;

Cy5-LPS / TRITC-LPS:用于多通道成像;

FITC-Dextran:用于細胞通透性和內吞實驗;

TLR4拮劑(如TAK-242):配合使用用于信號通路研究。

西安齊岳生物專業提供各類熒光標記產品及定制服務,覆蓋小分子藥物、蛋白質、多肽、核酸等多種生物分子。我們采用FITC、Cy3、Cy5、Alexa Fluor等多種主流熒光染料,滿足科研和產業在分子成像、藥物追蹤、機制研究等領域的需求。

西安齊岳生物確保標記分子高效、穩定且保留生物活性。我們支持個性化定制,靈活設計標記方案,快速響應客戶需求。

廠家:西安齊岳生物科技有限公司

用途:科研

狀態:固體/粉末/溶液

產地:西安

溫馨提醒:僅供科研,不能用于人體實驗!

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