AF 555 tyramide,AF555 酪胺的反應步驟
AF555 Tyramide 是一種酪胺(tyramide)類熒光信號放大試劑,將 Alexa Fluor 555 染料與酪胺結構共價連接,具備高靈敏度與空間分辨率的特點。其核心應用為辣根過氧化物酶(HRP)催化下的TSA(Tyramide Signal Amplification)系統,用于免疫組織化學、原位雜交、和單分子RNA檢測等。
反應步驟如下:
1. 初級抗體結合目標分子: 首先將樣品(細胞或組織)經固定和封閉處理后,引入與目標分子結合的一抗,識別并特異性結合于靶標。
2. 加入HRP標記的二抗或聚合物復合物: HRP用于催化AF555 Tyramide的氧化激活。為保證信號定位精度,推薦使用親和力強、非交叉反應的HRP綴合抗體。
3. 引入AF555 Tyramide工作液: 在含H?O?的緩沖體系中,AF555 Tyramide在HRP催化下被氧化,轉化為高反應性的酚自由基。
4. 共價沉積: 活化的AF555自由基與靠近HRP酶的靶標蛋白中的酪氨酸殘基共價結合,形成永久性信號沉積。這種共價結合避免了信號淬滅或脫落,可長期保存樣本。
5. 洗滌和成像: 去除多余反應液后,可直接使用熒光顯微鏡或激光共聚焦成像。AF555 的激發/發射波長為555/565 nm,具有鮮明的橙紅色熒光,與AF488、AF647等可組合進行多色成像。
AF555 Tyramide 的反應體系具有高靈敏度(檢測信號可放大100倍以上)、低背景、適用于微量靶標的檢測,是組織級別分子成像的關鍵試劑之一。
產品名稱:AF 555 tyramide
純度:95%+
性狀:基于不同的分子量,呈白色 / 類白色固體,或液體。
溶劑:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常規有機溶劑。
儲藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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僅供科研,不能用于人體實驗AXC.2025.06.23