文獻：iRGD通過增強胃癌淋巴細胞浸潤與PD-1敲除免疫療法產生協同作用

鏈接：https://www.nature.com/articles/s41467-019-09296-6

作者：丁乃清,鄒正云,沙惠子,舒蘇,錢漢清,孟凡艷,陳方軍,杜世耀,周淑娟,陳紅張蓮如,鞠陽賈偉&劉寶瑞 

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DSPE-PEG-iRGD修飾T細胞

為了將iRGD固定在T細胞膜上，我們在肽的C末端引入了一個半胱氨酸殘基。游離的巰基使得iRGD能夠通過邁克爾加成反應連接到2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸-乙醇胺-N-馬來酰亞胺（DSPE-PEG-Mal）的馬來酰亞胺基團上（圖 1a）。MALDI-TOF和1 H NMR分析表明成功制備了DSPE-PEG-iRGD（圖 1b和補充圖 1a）。采用相同方法構建了DSPE-PEG-iRGD-FAM，用于某些實驗。結果表明，所得 DSPE-PEG-iRGD-FAM 在共培養過夜后能自發地從溶液轉移到 T 細胞表面（圖 1c和補充圖 1b），而不會影響細胞活力、表型或效應功能（補充圖 2a-e）。此外，20 μg DSPE-PEG-iRGD 可 100% 覆蓋 10 6 個活化的 T 細胞（圖 1d和補充圖 1c）。由于結合穩定性是細胞表面修飾的關鍵參數，我們研究了 DSPE-PEG-iRGD-FAM 的細胞表面動力學。培養 60 小時后，DSPE-PEG-iRGD-FAM 修飾的 T 細胞的相對熒光強度下降至 50%，這大約是淋巴細胞的倍增時間（圖 1e）。該結果表明我們所應用的細胞表面改性平臺具有良好的穩定性。

DSPE-PEG-iRGD的合成及其細胞表面修飾。a脂質偶聯iRGD的合成示意圖。b MALDI -TOF表征DSPE-PEG-Mal和DSPE-PEG-iRGD構建體。分子量的差異表明iRGD和DSPE-PEG-Mal成功連接。c單獨的T細胞（灰色）以及與iRGD-FAM（藍色）和DSPE-PEG-iRGD-FAM（紅色）孵育的細胞的流式細胞術直方圖。d使用流式細胞術分析DSPE-PEG-iRGD-FAM修飾細胞的百分比。e 使用流式細胞術分析培養期間FAM-DSPE-PEG-iRGD修飾細胞的相對平均熒光強度的變化。數據表示平均值±標準差；n ?= 3. T + iRGD，T 細胞與游離 iRGD 共同給藥；T-iRGD，經 DSPE-PEG-iRGD 修飾的 T 細胞

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