DSPE-PEG-NBD在肺靶向納米脂質體中的示蹤功能與成像應用探索

鏈接：https://link.springer.com/article/10.1186/s12951-024-02781-1

作者：謝申霞,韋石,段斯良,黃夏寧,劉愛群,侯曉瓊,林宣東,鐘丹妮,孫書陽,丁自強,楊小梅,陳曉媛&路曉玲 

摘要：

納米醫學的出現需要新型的運載載體來主動靶向其作用位點。本文展示了肺靶向載藥脂質體的研發及其功效、特異性和安全性。我們的研究重點關注糖皮質激素甲基潑尼松龍 (MPS)，這是一種常用于*肺損傷的藥物。該類固醇分子被負載于功能化的納米空間穩定單層脂質體 (NSSL) 中。靶向功能是通過結合表面活性蛋白 A (SPANb) 納米*體形成的 MPS-NSSLs-SPANb 來實現的。MPS-NSSLs-SPANb 表現出良好的粒徑分布、形貌和包封率。動物實驗證明了 MPS-NSSLs-SPANb 對肺具有高度特異性。 MPS-NSSLs-SPANb *可降低大鼠支氣管肺泡灌洗液中 TNF-α、IL-8 和 TGF-β1 的水平以及肺組織中 NK-κB 的表達，從而減輕肺損傷并提高大鼠存活率。納米*體功能化的納米顆粒在*肺損傷方面表現出優于*體功能化的系統。

材料：

1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿 (DSPC)、硝基苯并呋咱 (DSPE-PEG-NBD) 購自 Avanti Polar Lipids, Inc. (阿拉巴馬州阿拉巴斯特)。1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-PEG 3400 -NH 2 (DSPE-PEG 3400 -NH 2 ) 購自 Nanocs Inc. (紐約州紐約市)。N-琥珀酰亞胺碘乙酸酯 (SIA 交聯劑) 購自 Thermo Scientific (馬薩諸塞州沃爾瑟姆)。磷酸鹽緩沖液 (PBS, pH 7.4) 和膽固醇 (CHOL) 購自 Sigma-Aldrich (密蘇里州圣路易斯)。SP-A *原由上海優龍生物科技有限公司 (中國上海) 合成。 SP-A納米*體（SPANb）由上海市肺科醫院呼吸疾病實驗室合成（Gajic等，引文2011）。所有其他化學品和溶劑均為分析純。所有水相制備均使用Milli-Q H 2 O (18.2 MΩ)。所有化合物均未經進一步純化使用。

采用pH梯度遠程加載法制備甲基潑尼松龍NSSL

將 SPANb 與 MPS–NSSLs 共軛形成 MPS–NSSLs–SPANb

將SPANb與MPS-NSSLs混合，然后在4°C下孵育過夜以進行結合。為了優化結合效率，將SPANb和MPS-NSSL以不同的His標簽與碘乙酸鹽的摩爾比混合。在XCell SureLock Mini-Cell電泳系統（Invitrogen，卡爾斯巴德，加利福尼亞州）上進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分析，以確認SPANb與MPS-NSSLs的結合。使用Image J軟件（Bethesda，MD）對染色的凝膠進行積分，計算結合效率百分比（Gajic等人，引文2011）。結合后，MPS–NSSLs–SPANb（SPANb 和 MPS-NSSLs 的混合物）通過凝膠過濾純化，純化柱為 Superose 12 10/300 柱（GE Healthcare，Chicago，IL），并用 PBS 平衡以去除游離的 SPANb。對于 FITC 標記的 MPS-NSSLs-SPANb（MPS-NSSLs-SPANb-FITC），使用相同的方法，將 SPANb 替換為 FITC 標記的 SPANb（SPANb-FITC）。使用 DSPE-PEG-NBD 替換/混合 MPS，然后使用相同方法制備 MPS-NSSLs-NBD/NSSLs-NBD。

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