DSPE-PEG-Nb助力納米*體脂質體構建及其在光熱增強T細胞*中的應用

鏈接：https://link.springer.com/article/10.1186/s12951-024-02781-1

作者：謝申霞,韋石,段斯良,黃夏寧,劉愛群,侯曉瓊,林宣東,鐘丹妮,孫書陽,丁自強,楊小梅,陳曉媛&路曉玲 

摘要：

背景：基于T細胞的免疫療法在募集和激活針對實體瘤的*特異性T細胞方面面臨巨大挑戰。其中，利用納米*體（Nb）或納米*體（Nbs）構建T細胞銜接器已成為增強T細胞**效力的更具實用價值的方法。本研究設計了一種新型Nb介導的多功能T細胞銜接器（Nb-MuTE），它不僅可以將效應T細胞募集到*組織中，還能與光熱效應協同作用，有效激活T細胞的**免疫功能。

結果：Nb-MuTE 是基于吲哚菁綠 (ICG) 脂質體構建的，表面結合了 CD105 和 CD3 Nbs，表現出對*和 T 細胞均具有*的靶向性，能夠增強*特異性 T 細胞的活化、增殖和細胞因子分泌。值得注意的是，在體外和體內實驗中，ICG 誘導的光熱效應進一步增強了 Nb-MuTE 介導的 T 細胞的免疫**功能。

結論：這種新平臺Nb-MuTE為臨床*實體*增強T細胞反應提供了一種實用的“一體化”策略。

節選：

CD105/CD3 Nb-LipoICG的制備及純化

脂質體 (Lipo) 采用略加修改的薄膜水化方法制備。簡而言之，將二硬脂酰磷脂酰膽堿 (DSPC; Aladdin，中國)、膽固醇琥珀酸單酯 (Chol; Aladdin，中國) 和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇 2000 (DSPE-PEG-2000; Aladdin，中國) 以 3:2:0.015 的摩爾比溶于圓底燒瓶中的氯仿和甲醇 (4:1 (v/v) ) 的混合溶液中。用旋轉蒸發儀在 50 oC下完全蒸發混合溶劑。形成的脂質膜用 1×PBS 緩沖液復水至總脂質的終濃度為 2 mg/mL，然后用 0.22 μm 針濾器過濾。通過孔徑為 100 nm 的聚碳酸酯膜（Nuclepore，美國加利福尼亞州普萊森頓）的多次擠壓步驟（至少 10 次）使脂質體尺寸均勻化。

將5 mg/mL的ICG-甲醇溶液按質量梯度加入到脂質混合物中，同法制備包覆ICG的納米脂質體（LipoICG），上Sephadex G-50葡聚糖凝膠柱除去未包覆的游離ICG。將功能性Nb修飾的LipoICG（CD105/CD3 Nb-LipoICG）分別將CD105 Nb和CD3 Nb與DSPE-PEG2000-NHS共孵育，NHS基團在4 ℃下與CD105 Nb和CD3 Nb上的氨基發生親核取代反應，形成穩定的酰胺鍵，繼續攪拌24 h后形成DSPE-PEG-Nb膠束。

將形成的DSPE-PEG-Nb膠束加入LipoICG中，在氮氣保護下反應10min，放入微孔板恒溫振蕩器（德國Eppendorf公司）中，以緩慢的振蕩速度在4℃下孵育12h，用Sephadex G-50柱除去游離的未結合的Nb。

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