BSA-FITC(熒光素標記牛血清白蛋白)合成制備
中文名稱:FITC標記牛血清白蛋白
英文名稱:BSA-FITC(Bovine Serum Albumin-Fluorescein)
別名:FITC-BSA、熒光牛血清蛋白
供應商:西安齊岳生物科技有限公司
用途:科研
一、反應原理:
FITC(異硫氰酸熒光素)具有活潑的異硫氰酸基團,可與蛋白質賴氨酸殘基的氨基反應,生成穩定的硫脲鍵,從而將熒光團共價連接至蛋白上。
二、原料準備:
BSA:常用濃度為10 mg/mL,在0.1 M NaHCO?緩沖液中(pH 8.5)溶解;
FITC:在DMSO或乙醇中新鮮配制(常用濃度為1–10 mg/mL);
緩沖液:0.1 M NaHCO?或PBS(pH 8.5)
三、合成步驟:
反應配比
按BSA與FITC摩爾比1:3~1:10配制反應體系(根據標記密度需求調整);
在避光條件下緩慢滴加FITC至BSA溶液中,并輕微攪拌。
孵育反應
反應通常在4°C或室溫避光下進行4–12小時;
控制pH在8.0–8.5,有利于反應效率,防止蛋白質變性。
純化處理
反應后需用透析袋(10 kDa)進行48小時透析,更換PBS緩沖液3–4次以去除游離FITC;
也可使用凝膠層析柱(如Sephadex G-25)進行分離。
檢測與儲存
用UV-VIS分光光度計測定FITC吸收峰(495 nm)與蛋白280 nm吸收比值,計算標記密度(FITC/BSA);
建議冷凍(-20°C)避光保存,加入0.01% NaN?防止微生物污染。
四、應用與優勢:
應用:
細胞攝取實驗:用于示蹤蛋白質攝取與分布;
免疫組化:作為非特異性對照蛋白;
熒光成像:觀察蛋白質運輸、血腦屏障通透性等;
載藥或納米材料示蹤:例如FITC-BSA納米粒;
優勢:
熒光強度高,綠色可視化清晰;
BSA為天然蛋白,生物相容性優;
標記工藝成熟,重復性強。
關于我們:
西安齊岳生物提供的熒光標記服務支持糖化學、蛋白質、多肽、抗體、核酸及納米材料等多種生物分子的熒光化修飾。可提供多種熒光探針(如FITC、Cy3、Cy5、Alexa Fluor系列、ICG等),根據應用場景(流式細胞、共聚焦、活體成像等)選擇合適波長及標記方式。服務包含標記反應、純化、標記率評估及質量驗證,確保分子活性和信號強度。適用于細胞追蹤、分子成像、靶向驗證等研究,亦可提供定制熒光強度、pH響應或近紅外探針功能化服務。
以上資料由小編zhn提供,僅用于科研
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