FITC-胰蛋白酶(Fluorescein Isothiocyanate-labeled Trypsin)是胰蛋白酶(Trypsin)與熒光染料異硫氰酸熒光素(FITC)共價(jià)結(jié)合形成的熒光標(biāo)記酶。
胰蛋白酶是一種廣泛使用的蛋白水解酶,主要用于切割蛋白質(zhì)的特定肽鍵,而FITC作為一種綠色熒光染料,通過(guò)其異硫氰酸基團(tuán)與胰蛋白酶的賴氨酸殘基等氨基形成共價(jià)鍵,實(shí)現(xiàn)胰蛋白酶的熒光標(biāo)記。
組成與性質(zhì)
胰蛋白酶(Trypsin)
胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶,能夠選擇性地切割賴氨酸和精氨酸的羧基端肽鍵,常用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究中的蛋白質(zhì)消化、細(xì)胞脫離等過(guò)程。
FITC標(biāo)記
FITC分子通過(guò)異硫氰酸基團(tuán)與胰蛋白酶的游離氨基共價(jià)結(jié)合,賦予胰蛋白酶熒光特性,激發(fā)波長(zhǎng)約490 nm,發(fā)射波長(zhǎng)約520 nm,便于熒光檢測(cè)。
性質(zhì)特點(diǎn)
熒光活性
FITC-胰蛋白酶具有強(qiáng)烈的綠色熒光信號(hào),便于在熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)及熒光板讀數(shù)儀中檢測(cè)。
酶活性保留
經(jīng)過(guò)FITC標(biāo)記后,胰蛋白酶通常保留其酶學(xué)活性,能夠繼續(xù)執(zhí)行蛋白水解功能,但標(biāo)記程度過(guò)高可能對(duì)活性有一定影響。
水溶性好
FITC-胰蛋白酶在水溶液中穩(wěn)定,適合多種生物實(shí)驗(yàn)條件。
共價(jià)結(jié)合穩(wěn)定
FITC與胰蛋白酶形成的硫脲鍵較為穩(wěn)定,保證熒光信號(hào)的持久性,但需注意避免強(qiáng)光照射和極端pH以防熒光淬滅。
使用注意事項(xiàng)
保存條件
FITC-胰蛋白酶應(yīng)避光保存,通常置于4℃冷藏,以保持酶活性和熒光強(qiáng)度。
緩沖液選擇
使用適宜的緩沖體系(pH 7-8)以維持酶的穩(wěn)定性和熒光性能。
酶活性監(jiān)測(cè)
標(biāo)記后需確認(rèn)酶活性,避免因標(biāo)記過(guò)度導(dǎo)致活性喪失。
避免光漂白
操作時(shí)避免長(zhǎng)時(shí)間強(qiáng)光照射,減少熒光淬滅現(xiàn)象。
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