fitc熒光染料激發發射波長是多少？Fitc的使用方法介紹！

FITC（Fluorescein Isothiocyanate，異硫氰酸熒光素）是一種經典且廣泛使用的綠色熒光染料，在免疫學、細胞生物學和生物化學實驗中被用來標記抗體、蛋白質、多肽、寡核苷酸等，用于熒光顯微鏡、流式細胞術（FACS）、ELISA和各種生物成像。

基本信息

中文名稱：異硫氰酸熒光素

英文縮寫：FITC

激發波長（Ex）：約 495 nm

發射波長（Em）：約 519–525 nm

熒光顏色：綠色

分子量：約 389.4 Da（FITC-NH2）；依賴于修飾形式

溶解性：可溶于DMSO、DMF、少量有機溶劑；低水溶性

化學結構與偶聯機制

功能基團：異硫氰酸基（–N=C=S）

作用機制：可與生物分子的伯胺（–NH?）發生共價反應，常用于抗體、蛋白質或多肽的標記。

應用領域

抗體/蛋白標記

FITC常用于免疫熒光實驗（IF）或流式細胞術（FACS）中標記一抗或二抗，方便追蹤目標分子的表達與分布。

流式細胞術

標記細胞表面或胞內抗原，用于細胞分型、凋亡分析、活性評估等。

熒光顯微成像

可檢測細胞或組織中抗原的定位和表達，通過FITC標記抗體實現綠色信號顯示。

多重染色

與其他熒光染料（如TRITC、DAPI、Cy5等）組合用于多通道成像實驗。

DNA/RNA探針標記

可與寡核苷酸連接，用于FISH、雜交探針和qPCR探針開發。

? 優點

應用廣泛，具有高度成熟的使用體系

成本低，易于獲取

與多數檢測系統兼容（如顯微鏡、流式、酶標儀等）

缺點和注意事項

光穩定性差：易被光照分解，長時間曝光會發生熒光淬滅，需避光操作

pH敏感：熒光強度受pH影響較大（在 pH 6.5~8.0 范圍內較穩定）

易水解：異硫氰酸基團對水敏感，應現配現用

熒光壽命短：信號持續性較差，不適合長時程追蹤成像

常見FITC衍生物

與其他綠色熒光染料比較

抗體FITC標記操作簡要流程（NHS酯法）

溶解FITC-NHS于DMSO（避免水）

將蛋白質溶于堿性緩沖液（如0.1 M NaHCO?，pH 8.5）

按比例加入FITC-NHS溶液（一般摩爾比為5~20:1）

避光孵育1小時

使用透析或凝膠過濾柱去除游離FITC

測定標記效率（通過光密度比OD495/OD280）

總結

FITC 是一種經典、高效且經濟的熒光染料，適用于多種生物標記實驗。它的綠色熒光信號清晰、易于檢測，但在光照和pH條件下需控制，適合短期觀察實驗和常規標記。