免疫比濁法和ps聚苯乙烯納米微球的制備方法

免疫比濁法（Turbidimetric inhibition immuno assay）是抗原抗體結合動態測定方法。其基本原理是：當抗原與抗體在特殊稀釋系統中反應而且比例合適(一般規定抗體過量)時，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現濁度。當抗體濃度固定時，形成的免疫復合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應液的濁度也隨之增加。通過測定反應液的濁度與一系列標準品對照，即可計算出檢樣中抗原的含量。

分類

1.免疫透射比濁法 ：抗原抗體結合后，形成免疫復合物，在一定時間內復合物聚合出現濁度。當光線通過溶液時，可被免疫復合物吸收。免疫復合物量越多，光線吸收越多。光線被吸收的量在一定范圍內與免疫復合物的量成正比。利用比濁計測定光密度值，復合物的含量與光密度值成正比，同樣當抗體量一定時，光密度值也與抗原含量成正比。本法較單向瓊脂擴散試驗和火箭電泳等一般免疫化學定量方法敏感、快速簡便，但要求免疫復合物的數量和分子量達到一定高度，否則就難以測出。

2.免疫散射比濁法 ：一定波長的光沿水平軸照射，通過溶液使遇到抗原抗體復合物粒子，光線被粒子顆粒折射，發生偏轉，光線偏轉的角度與發射光的波長和抗原抗體復合物顆粒大小和多少密切相關。散射光的強度與復合物的含量成正比，即待測抗原越多，形成的復合物也越多，散射光也越強。散射光的強度還與各種物理因素，如加入抗原或抗體的時間、光源的強弱和波長、測量角度等密切相關。散射比濁法又分為速率散射比濁法和終點散射比濁法。

3.免疫膠乳比濁法 ：膠乳比濁法即是將待測物質相對應的抗體包被在直徑為15－60nm的膠乳顆粒上，使抗原抗體結合物的體積增大，光通過之后，透射光和散射光的強度變化更為**，從而提高試驗的敏感性。

直徑為15－60nm的膠乳顆粒常見：聚苯乙烯。

注意事項

抗體（Ab）與可溶性抗原（Ag）反應，形成一定結構的免疫復合物，成為懸浮于反應溶液中的微粒。在沉淀反應中形成的復合物微粒具有特殊的光學性質，可用儀器檢測，提高了檢測的速度、靈敏度和易操作性。

免疫比濁測定注意事項：

1、抗原或抗體量大大過剩，可出現可溶性復合物，造成誤差。

2、應維持反應管中抗體蛋白始終過剩。

3、易受到脂血的影響。

發展歷程

早期免疫分析通過觀察沉淀物形成，凝集及溶血現象發生來分析，如免疫擴散、免疫電泳、血凝試驗、補體結合等。

上世紀50年代末60年代初，利用AG-AB復合物形成使濁度改變，再用比濁計來比濁，但因其敏感性差未被接受。

70年代初，開始有自動檢測系統，但因其用的是激光為光源，固定波長，靈敏度較低，而且時間一般要2—3小時，很難滿足臨床需要。

70年代末，速率比濁計的出現，使抗原抗體結合的反應在幾十秒內出結果，可以說是免疫化學測定的革命性的發展。

隨著標記技術的發展，免疫化學納入臨床化學檢驗范疇。

脫硫劑在脫硫過程中所發生的反應是氣固反應，在反應過程中都涉及到復雜的氣固傳質過程，聚苯乙烯微球可作為脫硫劑制備中的造孔劑，但是目前的技術問題是很難制作出連續均勻的聚苯乙烯納米微球。

聚苯乙烯納米微球的制備方法

將十二烷基硫酸鈉和一定量去離子水在室溫下加入四頸燒瓶中，攪拌混合液至澄清后，加入NaOH/NaHCO3的緩沖溶液和苯乙烯，攪拌2h后快速升溫至80℃，在此過程中勻速滴加過硫酸鉀溶液，控制滴加時間30min，滴加完畢后恒溫反應8h即可得到白色漿狀物的聚苯乙烯微球乳液。

所使用的化學材料為：

苯乙烯（液態、級別：分析純）、過硫酸鉀（固態、級別：分析純）、氫氧化鈉（固態、級別：分析純）、十二烷基硫酸鈉（固態、級別：分析純）、碳酸氫鈉（固態、級別：分析純）。

方法一：

1，取氫氧化鈉和碳酸氫納各0.1g+0.001g配成復合緩沖溶液。

2，取過硫酸鉀0.45g±0.001g去離子水20ml±0.1ml，加入燒杯中，攪拌均勻，配成0.1mol/L 的過硫酸鉀水溶液。

3，取十二烷基硫酸鈉 1g±0.001g，去離子水500ml+0.1ml在室溫下加入一個1000mL的四頸燒瓶中，攪拌混合液至澄清后，取氫氧化鈉和碳酸氫納緩沖溶液10ml和苯乙烯3ml，攪拌2h后快速升溫至80℃，在此過程中勻速滴加過硫酸鉀溶液10ml +0.1ml，控制滴加時間30min，滴加完畢后恒溫反應8h，停止攪拌與加熱，待自然冷卻至常溫即可得到白色漿狀物的聚苯乙烯微球乳液，乳液中的微徑平均為50nm。

方法二：

1，取氫氧化鈉和碳酸氫納各0.1g+0.001g配成復合緩沖溶液。

2，取過硫酸鉀0.45g±0.001g去離子水20ml±0.1ml，加入燒杯中，攪拌均勻，配成0.1mol/L 的過硫酸鉀水溶液。

3，取十二烷基硫酸鈉1 g±0.001g，去離子水500ml+0.1ml在室溫下加入一個1000mL的四頸燒瓶中，攪拌混合液至澄清后，取氫氧化鈉和碳酸氫納緩沖溶液10ml和苯乙烯5ml，攪拌2h后快速升溫至80℃，在此過程中勻速滴加過硫酸鉀溶液10 ml +0.1ml，控制滴加時間30min，滴加完畢后恒溫反應8h，停止攪拌與加熱，待自然冷卻至常溫即可得到白色漿狀物的聚苯乙烯微球乳液，乳液中的微徑平均為60nm。

wyf 04.12