一種在半胱氨酸反應中具有雙功能的亞砜交聯劑-雙馬來酰亞胺亞砜BMSO

一種新的可用于探究蛋白質與蛋白質相互作用的亞砜交聯劑-雙馬來酰亞胺亞砜（BMSO）。這種交聯劑含質譜裂解基團且在半胱氨酸反應中具有雙功能。

 我們知道蛋白質通常以多單位蛋白復合物的形式發揮功能。這些大分子實體參與復雜的蛋白質-蛋白質相互作用（PPI），用于控制不同范圍的生物學過程，PPIs的完全表征可以幫助我們了解蛋白質復合物的組裝、結構和功能，對人類病理診斷有重要的作用。目前交聯質譜（X-MS）已成為一種較為成熟的技術，用于定義蛋白質-蛋白質相互作用（PPIs）和闡明大蛋白復合物的結構。

 到目前為止，較廣泛使用的交聯試劑是靶向性的賴氨酸。雖然該試劑已經成功地應用于蛋白質組范圍內的PPIs圖譜表征，但綜合PPI圖譜的表征需要功能更加突出的交聯試劑。半胱氨酸是較有活性的氨基酸之一，由于其在蛋白質結構中的獨特作用而成為一個有吸引力的交聯靶點。雖然巰基反應性交聯劑是市售的，但因為它們難以鑒定半胱氨酸交聯肽，所以在X-MS研究中的應用仍然稀少。

在各種類型的半胱氨酸反應試劑中，馬來酰亞胺是較廣泛使用的，鑒于亞砜基裂解的穩健性，通過實驗設計出了新的反應交聯劑，雙馬來酰亞胺亞砜（BMSO）。使用標準肽和蛋白質，證明了BMSO交聯肽與其他含亞砜的交聯肽具有相同的特征質譜可裂解特性。

 而且，同樣的MSN工作流程可用于簡化和準確地鑒定含有亞砜的質譜可裂解交聯肽。交聯化學促進了BMSO交聯半胱氨酸殘基的快速和簡化鑒定。然而，不同于DSSO（NHS，胺反應）和DHSO（酰肼，酸性殘基反應）交聯化學，半胱氨酸通過馬來酰亞胺結合可以產生兩種不同形式的交聯半胱氨酸，其中包含位點（封閉環）或水解態（開放環）結構。雖然這種發生可能降低交聯譜豐度，但已經表明，開放環的形成幾乎可以在實驗過程中完全完成，使在MSN分析期間交聯的肽離子異質性較小化。更重要的是，BMSO交聯半胱氨酸的環狀態不干擾其在MSN的分析鑒定，且允許識別未被賴氨酸和酸性殘基交叉交聯的區域，也能夠補充結構數據。

  BMSO代表了**個MS可裂解半胱氨酸反應交聯試劑，預期它將**促進針對半胱氨酸殘基的交聯研究。這項工作不僅擴大了具有不同化學成分的MS可裂解交聯劑的范圍，更重要的是利于提高PPI的研究深度。

wyf 03.26