綠色熒光蛋白(GFP)是一種能夠發出綠色熒光的蛋白質,它存在于維多利亞多管水母體內。發現維多利亞多管水母(A. victoria)可以發出藍綠色的光。在研究,他們從維多利亞多管水母(A. victoria)中分離純化出水母素,同時還發現了維多利亞多管水母(A. victoria)體內有綠色熒光蛋白存在。在1963年,發現鈣離子可以增強水母素的發光,在進一步的研究中從維多利亞多管水母(A. victoria)分離純化出GFP的晶體。而且還發現在沒有GFP存在時,水母素能夠發出很弱的藍色熒光,波長為470 nm;鈣離子和水母素結合后,將能量傳遞給GFP,導致GFP在紫外光下發出綠色熒光,波長為509 nm。
1、熒光蛋白結構以及發光特性
GFP結構
一級結構:GFP的生色團位于64至69的六肽內,更準確的說是65至67殘基(野生型GFP中是Ser-Try-Gly)生成的4-(對-羥基苯亞甲基)咪唑-5-啉酮。圖一為生色集團形成機制
圖1:生色團形成機制
晶體機構:綠色熒光蛋白晶體的立體結構是由11條β桶裝結構繞成的一個圓柱體,一條α螺旋纏繞在圓柱體的軸位置。生色團附著在α螺旋上,幾乎完美地包埋于圓柱體中心。這種方式被稱為β罐(圖2)。
圖2:GFP的三維結構
GFP發光特性
對GFP的氨基酸序列和發光特性進行研究,結果不表明:水母素要將能量傳遞給GFP后才可以讓GFP發出綠色的熒光;而GFP則能夠在藍光的激發下,直接發出綠色熒光
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