一、磁珠分選原理
磁珠分選是基于細(xì)胞表面抗原能與偶聯(lián)抗體的磁珠特異性結(jié)合,從而使細(xì)胞被標(biāo)記。標(biāo)記好的細(xì)胞過柱子(柱子周圍連磁鐵)時(shí),帶磁珠的細(xì)胞就留在柱子上,不帶磁珠的細(xì)胞就流走了,從而實(shí)現(xiàn)目的細(xì)胞的分選。
二、細(xì)胞標(biāo)記方式
利用磁珠分選細(xì)胞的關(guān)鍵點(diǎn)就是細(xì)胞標(biāo)記。標(biāo)記方式有兩種,包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記。
1、 直接標(biāo)記
直接標(biāo)記就是標(biāo)記目的細(xì)胞,是較快速、較特異的磁性標(biāo)記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類靈長類細(xì)胞的MACS直標(biāo)微珠可供選用。
2、 間接標(biāo)記
間接標(biāo)記就是標(biāo)記非目的細(xì)胞,需要聯(lián)合使用單克隆或多克隆抗體和微珠。未結(jié)合抗體、生物、生物素化抗體或熒光素標(biāo)記抗體均可作為一抗標(biāo)記細(xì)胞,再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠等作為二抗磁性標(biāo)記細(xì)胞。
三、磁珠分選策略
根據(jù)細(xì)胞標(biāo)記方式可以選擇不同的磁珠分選策略。
1陽性分選
陽性分選是目的細(xì)胞被磁性標(biāo)記,并直接分選出來,標(biāo)記的細(xì)胞可富集10000倍。分選后的細(xì)胞不必去除微珠,可立即培養(yǎng)或后續(xù)操作,其優(yōu)勢是純度高,回收率高,操作迅速,操作簡便。
2陰性分選
陰性分選又叫去除分選,磁性標(biāo)記非目的細(xì)胞,從而將非目的細(xì)胞從細(xì)胞混合物中去除。其適用范圍包括以下幾個(gè)方面:
① 去除不需要細(xì)胞;
② 缺乏針對(duì)目的細(xì)胞的特異性抗體;
③ 不需要抗體和目的細(xì)胞結(jié)合,如T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞功能分析;
④ 需要進(jìn)一步通過陽性選擇分選細(xì)胞亞群。
3復(fù)合分選
復(fù)合分選其實(shí)就是陰性分選和陽性分選的結(jié)合。如先陰性分選,去除非目的細(xì)胞,然后再陽性分選,獲取目的細(xì)胞。這種分選策略的適用范圍包括:
①非目的細(xì)胞也表達(dá)用來陽性分選目的細(xì)胞的抗原;
② 要分選稀有、珍貴細(xì)胞,先去除非目的細(xì)胞再陽性分選,可獲得高純度目的細(xì)胞。