熒光染料PI(碘化丙啶)是一種可對DNA染色的細(xì)胞核染色試劑,常用于細(xì)胞凋亡檢測,英文全稱是Propidium Iodide。它是一種溴化乙啶的類似物,在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。盡管PI不能通過活細(xì)胞膜,但卻能穿過破損的細(xì)胞膜而對核染色。PI經(jīng)常被用來與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用,
PI單染色法實驗步驟
1. 收集細(xì)胞{數(shù)目約(1~ 5)×106個/mL},500 ~ 1000 r/min離心5min,棄去培養(yǎng)液。
2. 3ml PBS洗滌1次。
3. 離心去PBS,加入冰預(yù)冷的70%的乙醇固定,4℃,1—2小時。
4. 離心棄去固定液,3mlPBS重懸5min。
5. 400目的篩網(wǎng)過濾1次,500—1000r/min離心5min,棄去PBS。
6. 用1ml PI染液染色,4℃避光30min。
7. 流式細(xì)胞儀檢測:PI用氬離子激發(fā)熒光,激光光波波長為488nm,發(fā)射光波波長大于630nm,產(chǎn)生紅色熒光分析PI熒光強(qiáng)度的直方圖也可分析前散射光對側(cè)散射光的散點圖。
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以上內(nèi)容來自齊岳小編 zzj2021.1.20