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一文了解:熒光FITC標記脂多糖/海洋硫酸多糖911
發布時間:2021-01-19     作者:zhn   分享到:

一文了解:熒光FITC標記脂多糖/海洋硫酸多糖911

FITC標記脂多糖的方法 :將 4mg脂多糖加入 2mL的0.5%三乙胺溶液中 0℃ 攪拌20min,使脂多糖雙鏈解離為單鏈結構。用 10 的1 mol·L 鹽酸將其 PH值調節為 5,然后加入含5mg的 FITC 的 0.1mol·L 磷酸鈉溶液 1.5mL(pH9.5),并 在 37~C下攪 拌孵育3h后,在4℃下將其混合物與磷酸鈉溶液徹底分離、 離-心后 ,去上清 即得FITC-脂 多糖 。 

FITC與殼聚糖連接的制備方法

在 10.0mL含 1% 殼聚 糖 的 0.1mol·L 乙酸溶液中,加入 10.0mL甲醇 ,再緩慢加 入一定體積的 2.0g·L 的 FITC甲醇溶液 。室溫暗處反應 3h后 ,用 0.2mol·L 氫氧化鈉沉淀標記產物” 。 從褐藻中提取出來的海洋硫酸多糖911,由于其末端不 含氨基 ,FITC標記多糖的化 學合成 反應分兩 步 :

一步 :911-Tyr的合成:將 400mg911溶于 15mL0.2mol·L 的磷酸鉀 緩沖液(pH8.0),然后依次加人 400mg酪胺和 150mg氰基 硼氫化鈉,于 37℃下反應96h,間或振蕩。反應完畢,離心分 離 ,將其上清液上 Sephadex G-25柱 ,用水 洗脫 收集 ,280llm 檢測 ,收集**峰 ,凍干得 911-Tyr。

二步 :911-Tyr-FITC合成:

取 200mg911-Tyr溶于水 ,用 0.5mol·L~NaHCO3調 pH  8.5,然后加入 25mgFITC,于室溫 、避 光下反應 過夜 ,再 向反應物中加入無水乙醇乙醇終濃度為 80% ,有大量亮黃 綠色沉淀析出,離心棄去上清液。沉淀加水復溶 ,乙醇再沉 淀,條件同上 ,重復 3次 ,得 911-Try-FITC,并進一步上 Sepha- dex G-25柱純化,收集相應水洗脫組分凍干保存 。

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FITC標記 911-Tyr的機制


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以上資料來自西安齊岳生物小編zhn2021.01.19






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