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一、概述

氨基活化瓊脂糖磁珠（Magarose-NH₂）是一種6%交聯(lián)的磁性瓊脂糖微球，磁珠在長間隔臂的末端含有反應(yīng)性伯胺，含有羧基（-COOH）的分子共價(jià)偶聯(lián)，用于親和純化。凝膠對于固定肽而言是理想的，用于抗體或其他結(jié)合配偶體的親和純化。

盡管其他胺反應(yīng)性方法可將分子固定化在氨基活化瓊脂糖磁珠上，但碳二亞胺（EDC）在交聯(lián)劑中是獨(dú)特的，使得能夠通過-COOH偶聯(lián)。在近中性至酸性pH緩沖液中，EDC能**地與羧酸鹽反應(yīng)形成中間體酯，其與親核試劑如氨基活化瓊脂糖磁珠上的伯胺反應(yīng)。在大多數(shù)親和純化方法中，分子和瓊脂糖凝膠載體之間產(chǎn)生的酰胺鍵是穩(wěn)定的，并且可防滲漏。

氨基活化瓊脂糖磁珠也適用于通過5'-磷酸基團(tuán)固定寡核苷酸。在咪唑存在下，EDC以與羧酸鹽大致相同的方式**地與磷酸基團(tuán)反應(yīng)。

二、產(chǎn)品特性

注：磁珠蛋白結(jié)合量與目標(biāo)蛋白特性相關(guān)，此處僅作參考值。

三、使用方法

1. 重要產(chǎn)品信息

• 使用EDC時(shí)，氨基磁珠將與C-末端、天冬氨酸或谷氨酸殘基的側(cè)鏈-COOH相偶聯(lián)。因?yàn)殡倪€含有伯胺（N-末端和賴氨酸殘基的側(cè)鏈），使用EDC的偶聯(lián)將導(dǎo)致肽的聚合以及它們固定到凝膠支持物上。通常這種聚合對隨后的親和純化方法無害。
• 連接水不溶性肽或其他分子時(shí)，請使用與水混溶的溶劑，如乙醇、甲醇、DMSO或DMF。**將肽溶解在水混溶性溶劑中，然后將該溶液加入偶聯(lián)緩沖液中。偶聯(lián)反應(yīng)中高達(dá)50％的有機(jī)溶劑濃度是相容的，除非已知肽在該濃度下變性。
• 傳統(tǒng)上，MES緩沖液用于EDC反應(yīng)，因?yàn)樗缓懈偁幮缘陌坊蛄姿猁}，并且**地保持了**的偶聯(lián)酸條件。然而，如果需要，可以替換其他緩沖液，并且偶聯(lián)將**地進(jìn)行至pH 7.2。盡管磷酸鹽緩沖液可以與EDC反應(yīng)，但降低偶聯(lián)效率。乙酸鹽、Tris和甘氨酸緩沖液與EDC或O-酰基異脲中間體反應(yīng)，不是合適的偶聯(lián)緩沖液。另外，避免使用含有硫醇的緩沖液，這些硫醇不可逆地結(jié)合EDC并使之失活。碘化物、氯化物和溴化物等鹵化物對pH值為5和7之間的EDC幾乎沒有影響。
• EDC / Magarose-NH₂方法也可用于通過5'-磷酸基團(tuán)固定寡核苷酸。