一抗二抗的選擇及偶聯標記

一抗的種屬來源

二抗應選用與使用的一抗相同的物種來源，例如：如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體，則相應的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據一抗的物種來源選擇相應的抗該物種的二抗。西安齊岳能為您提供抗不同種屬的二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、綿羊、人、豚鼠、豬、馬、牛、雞、鴨等二抗。

一抗的類別亞型

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應的二抗就是抗IgG抗體。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會在產品說明書中都會有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相應的二抗就應當是抗小鼠IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合，或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以選擇抗IgG1的二抗，此種抗體在雙標記實驗中尤其適合。在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下，可以選用抗相應物種IgG。西安齊岳能為您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特異性只結合IgM的AntiIgM （mu）Antibody、IgA的AntiIgA （alpha-Antibody、IgE的AntiIgE （epsilon）Antibody等。

二抗的種屬來源

一般來說，不同的種屬來源與二抗的質量沒有必然的聯系，來源于山羊的二抗與來源于兔的二抗在一般的實驗里沒有太多的差別。然而在一些特殊的實驗里，如雙標實驗里，如果其中一個一抗是山羊來源的，一個是小鼠來源的，則相應的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來源的。

二抗的耦聯標記

一般來講，耦聯到二抗上的探針主要有酶（辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團（FITC、Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等）、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。對于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶標二抗；而細胞或組織標記實驗（細胞免疫化學，組織免疫化學，流式細胞術）中通常使用熒光基團標記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測信號，可以使用Biotin/Avidin檢測系統。在一些熒光檢測方案中，則需要選擇不同的熒光標記；而金顆粒標記的二抗則更多的應用于免疫電鏡中。

在一些如胸腺、脾臟、血液的組織以及造血細胞、淋巴細胞、B細胞等細胞內，通常含有較多的Fc受體，這時候選擇二抗時**選擇Anti-IgG, F（ab’）2 fragment這樣的特異性二抗，這樣就消除了由于Fc部分與IgG的非特異性結合。常規的Anti-IgG （H+L）二抗與IgG的重鏈和輕鏈都有結合反應，即與IgG的Fc的F（ab’）2片段都能結合；由于IgG、IgM、IgA都有保守的輕鏈結構域，因此Anti-IgG （H+L）與它們都有交叉反應。而Anti-IgG, F（ab’）2 fragment經過了IgG Fc片段的吸附，因此只與IgG的F（ab’）2片段結合，然而IgG、IgM、IgA都有保守的輕鏈結構域，因此與它們也有交叉反應。