通過用牛血清白蛋白BSA與人凝血因子VIII偶聯后的偶聯物作為抗原免疫Balb/c小鼠，取其脾臟細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行細胞融合，用HAT培養基進行選擇性培養，利用有限稀釋法通過多次克隆化，經過篩選獲得穩定分泌抗人凝血因子VIII單克隆抗體的雜交瘤細胞株。

制備步驟：

1)制備免疫抗原：通過同型雙功能蛋白交聯劑將人凝血因子VIII與 牛血清白蛋白偶聯，得到人凝血因子VIII-牛血清白蛋白偶聯物；

2)免疫小鼠：采用小劑量長周期免疫方案，利用步驟1)中得到的人 凝血因子VIII-牛血清白蛋白偶聯物作用免疫抗原，對Balb/c小鼠進行免 疫；

3)細胞融合：將SP2/0小鼠骨髓瘤細胞與步驟2)獲得的免疫Balb/c 小鼠的脾臟細胞融合，在含有HAT的RPMI-1640培養基中進行選擇性培 養；

4)雜交瘤細胞的選擇性培養：在步驟3)中融合后的細胞在HAT培養基 中選擇性培養后，選擇小鼠脾臟細胞與小鼠雜交瘤細胞SP2/0的融合細胞；

5)單克隆化：將步驟4)中獲得的經檢測為陽性的雜交瘤細胞經有限稀釋法進行多次單克隆獲得穩定分泌抗人凝血因子VIII單克隆抗體的雜 交瘤細胞株。