通過用牛血清白蛋白BSA與人凝血因子VIII偶聯(lián)后的偶聯(lián)物作為抗原免疫Balb/c小鼠，取其脾臟細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行選擇性培養(yǎng)，利用有限稀釋法通過多次克隆化，經(jīng)過篩選獲得穩(wěn)定分泌抗人凝血因子VIII單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。

制備步驟：

1)制備免疫抗原：通過同型雙功能蛋白交聯(lián)劑將人凝血因子VIII與 牛血清白蛋白偶聯(lián)，得到人凝血因子VIII-牛血清白蛋白偶聯(lián)物；

2)免疫小鼠：采用小劑量長周期免疫方案，利用步驟1)中得到的人 凝血因子VIII-牛血清白蛋白偶聯(lián)物作用免疫抗原，對Balb/c小鼠進(jìn)行免 疫；

3)細(xì)胞融合：將SP2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞與步驟2)獲得的免疫Balb/c 小鼠的脾臟細(xì)胞融合，在含有HAT的RPMI-1640培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇性培 養(yǎng)；

4)雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng)：在步驟3)中融合后的細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基 中選擇性培養(yǎng)后，選擇小鼠脾臟細(xì)胞與小鼠雜交瘤細(xì)胞SP2/0的融合細(xì)胞；

5)單克隆化：將步驟4)中獲得的經(jīng)檢測為陽性的雜交瘤細(xì)胞經(jīng)有限稀釋法進(jìn)行多次單克隆獲得穩(wěn)定分泌抗人凝血因子VIII單克隆抗體的雜 交瘤細(xì)胞株。