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FITC標記凝集素的組織化學染色程序(具體實驗步驟)
發布時間:2020-09-18     作者:zhn   分享到:

西安齊岳生物**供應一系列的凝集素;同時提供各種熒光標記修飾偶聯的凝集素。提供羅丹明、CY3CY5FITC、生物素Biotin、瓊脂糖AgaroseDyLight 488DyLight 594DyLight 649Texas Red標記各種凝集素。

 

紫藤凝集素(WFA, WFL);小麥胚芽凝集素(WGA);長柔毛野豌豆外源凝集素 (VVL, VVA);荊豆凝集素(UEA-I);大豆凝集素(SBA);馬鈴薯凝集素 (STL, PL);黑接骨木凝集素 (SNA, EBL);蓖麻凝集素I (RCA I, RCA120);豌豆凝集素(PSA);菜豆白細胞凝集素(PHA-L);菜豆紅細胞凝集素 (PHA-E);花生凝集素 (PNA);喇叭水仙凝集素(NPLNPA);香蕉凝集素(BanLec);桑橙凝集素 (MPL);雙孢蘑菇凝集素(ABL);橙黃網胞盤菌凝集素(AAL);紫荊花菊凝集素(BPL);刀豆蛋白A (Con A);曼陀羅凝集素 (DSL);雙花扁豆凝集素(DBA);雪花蓮凝集素 (GNL);西非單葉豆凝集素 I (GSL I, BSL I);朱頂紅凝集素 (HHL, AL);木菠蘿凝集素;小扁豆凝集素 (LCA);;番茄凝集素 (LEL, TL);懷槐凝集素I (MAL I);懷槐凝集素II (MAL II)

 

FITC標記凝集素的組織化學染色程序

1.組織切片經脫蠟處理,若是Bouin液固定的組織,用70%乙醇洗3次除去組織切片內的黃色后,再用蒸餾水漂洗;

2PBS漂洗(1%牛血清白蛋白)2次,每次5分鐘;

3.加入FITC-凝集素(PBS適當稀釋),置濕盒內孵育,室溫1小時;

4PBS漂洗3次,每次5分鐘;

5.水溶性封片劑封片,熒光顯微鏡觀察。

6.結果 FITC標記的凝集素能直接與組織細胞內的糖基結合,從而顯示糖基的位置,可用于檢測組織細胞中的糖成分,陽性部位呈黃綠色熒光。

7.注意事項

(1)固定液:以Bouin固定液為佳,也可用70%乙醇固定;

(2)與其他組織化學方法一樣,染色過程中,應始終保持一定濕度,使切片保持濕潤狀態;

(3)需經預實驗確定FITC-凝集素的工作濃度;

(4)凝集素的活性部位需重金屬離子維持,故可用TBS作為緩沖液,加微量的金屬(CaCl2MgCl2MnCl210mmol/L),可增強凝集素的結合能力。

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