將特異性抗體與熒光色素通過化學方法結(jié)合起來，即可得到熒光抗體。這種熒光抗體與相應的抗原結(jié)合，形成熒光標記抗體-抗原復合物，再通過特定的儀器檢測熒光，從而對抗原抗體進行示蹤檢測。目前，熒光抗體因其高靈敏度、高特異性、易操作性被廣泛用于流式細胞儀、酶聯(lián)免疫吸附、蛋白印記、原位雜交、熒光成像等檢測中。

熒光素：能夠產(chǎn)生明顯熒光并能作為染料使用的有機化合物稱為熒光素或熒光染料。適用于標記蛋白的熒光色素主要有異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC），四乙基羅達明（rho-damine B200，RB200）和四甲基異硫氰基羅達明(tetramethyl rhodamine isotheynate，TMRITC)。實際上目前應用比較多的只有異硫氰酸熒光素一種。

下面我們就以異硫氰酸熒光素(FITC)為例，簡要介紹一下抗體的熒光素標記方法。

許多蛋白質(zhì)表面含有較多的賴氨酸殘基，這些賴氨酸殘基的游離ε-氨基可與FITC共價結(jié)合。與FITC結(jié)合的抗體可用為特異性的探針，以測定細胞相應抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量（發(fā)射光與吸收光的比值為0 .85），而且形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好，F(xiàn)ITC是目前應用比較廣的熒光染料。在pH 9.8條件下，賴氨酸殘基的游離ε-氨基與FITC發(fā)生的親核反應，由此形成硫脲連接。

異硫氰酸熒光素常用的標記法有以下兩種：

1）攪拌法(適合大樣品)

• 取一定量的純化后的IgG溶液，用0.5 mol/L pH9.8碳酸鹽緩沖液稀釋至20 mg/mL。

• 按熒光素與抗體比1︰20~1︰100(一般用1︰100)稱取異硫氰酸熒光素，用pH9.8碳酸鹽緩沖液溶解。

• 將IgG溶液置于電磁攪拌器上，啟動開關(guān)，輕輕攪拌，以不起沫為準。逐滴加入熒光素液(約10min~15min加完)。實驗過程中，隨時測定攪拌液的pH值，若低于9.0，則應以碳酸鈉溶液調(diào)整。置4 ℃攪拌6 h～12 h即可。

2）透析法（適合小樣品）

• IgG溶液用0.5 mol/L pH9.8碳酸鹽緩沖液稀釋成1%濃度，裝入透析袋中。

• 將熒光素配成0.1 mg/mL，其量為1%抗體溶液的10倍，裝入燒杯中。

• 將透析袋置于燒杯中，放電磁攪拌器上4 ℃攪拌24即可。

透析法的優(yōu)點是標記均勻，非特異性熒光少，但所標記的時間長，熒光素的用量多，約比攪拌法多10倍。

西安齊岳生物提供異硫氰酸熒光素（FITC）標記抗體Anti-FITC Antibodies

• 熒光標記單克隆抗體

• 熒光標記多克隆抗體

• 熒光標記重組抗體

• 熒光標記結(jié)合抗體

• 熒光標記非結(jié)合抗體

• 熒光標記特異性抗體

• 熒光標記細胞凋亡相關(guān)抗體

• 熒光標記細胞器定位相關(guān)抗體

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