西安齊岳生物**供應一系列的凝集素;同時提供各種熒光標記修飾偶聯(lián)的凝集素。提供羅丹明、CY3、CY5、FITC、生物素Biotin、瓊脂糖Agarose、DyLight 488、DyLight 594、DyLight 649、Texas Red標記各種凝集素。
FITC-GSL I熒光素標記的西非單葉豆凝集素 I Fluorescein labeled Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I (GSL I, BSL I) GSLⅠ是一個分子量約為114kda的糖蛋白家族。有兩種亞單位,稱為A和B,分子量略有不同。這些亞基結合形成四聚體結構,形成五個分離蛋白。富含A的凝集素優(yōu)先凝集血型A紅細胞,因此似乎對α-N-乙酰半乳糖胺殘基具有特異性,而富含B的凝集素優(yōu)先凝集血型B細胞,并且對α-半乳糖殘基具有特異性。我們的GSL I是五種隔離物的混合物。據(jù)報道,GSL-I與包括層粘連蛋白在內的多種糖蛋白結合。 熒光素標記的GSL-I具有適當數(shù)量的熒光色素結合,為該凝集素提供**的染色特性。這種共軛物基本上不含未結合的熒光色素。 激發(fā)**值為495nm 發(fā)射**值為515nm
FITC標記凝集素的組織化學染色程序
1.組織切片經(jīng)脫蠟處理,若是Bouin液固定的組織,用70%乙醇洗3次除去組織切片內的黃色后,再用蒸餾水漂洗;
2.PBS漂洗(含1%牛血清白蛋白)2次,每次5分鐘;
3.加入FITC-凝集素(PBS適當*釋),置濕盒內孵育,室溫1小時;
4.PBS漂洗3次,每次5分鐘;
5.水溶性封片劑封片,熒光顯微鏡觀察。
6.結果 FITC標記的凝集素能直接與組織細胞內的糖基結合,從而顯示糖基的位置,可用于檢測組織細胞中的糖成分,陽性部位呈黃綠色熒光。
注意事項
(1)固定液:以Bouin固定液為佳,也可用70%乙醇固定;
(2)與其他組織化學方法一樣,染色過程中,應始終保持一定濕度,使切片保持濕潤狀態(tài);
(3)需經(jīng)預實驗確定FITC-凝集素的*佳工作濃度;
(4)凝集素的活性部位需重金屬離子維持,故可用TBS作為緩沖液,加微量的金屬(CaCl2、MgCl2、MnCl2各1.0mmol/L),可增強凝集素的結合能力。
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