西安齊岳生物**供應一系列的凝集素;同時提供各種熒光標記修飾偶聯的凝集素。提供羅丹明、CY3、CY5、FITC、生物素Biotin、瓊脂糖Agarose、DyLight 488、DyLight 594、DyLight 649、Texas Red標記各種凝集素。
雙孢蘑菇凝集素(ABL)是由兩個至四個非常相似的分離蛋白組成,每個四聚體約17 kD亞基。這種凝集素結合Thomsen-Friedenreich抗原,也稱為T-二糖,半乳糖基(β-1,3)N-乙酰半乳糖胺。不同于花生凝集素,它不結合唾液酸化的T抗原,ABL結合唾液酸化或無唾液酸化的形式。ABL結合所有血型和IgA亞類的O-連接聚糖。簡單的一糖和二糖只具有輕微的。
FITC標記凝集素的組織化學染色程序
1.組織切片經脫蠟處理,若是Bouin液固定的組織,用70%乙醇洗3次除去組織切片內的黃色后,再用蒸餾水漂洗;
2.PBS漂洗(含1%牛血清白蛋白)2次,每次5分鐘;
3.加入FITC-凝集素(PBS適當*釋),置濕盒內孵育,室溫1小時;
4.PBS漂洗3次,每次5分鐘;
5.水溶性封片劑封片,熒光顯微鏡觀察。
6.結果 FITC標記的凝集素能直接與組織細胞內的糖基結合,從而顯示糖基的位置,可用于檢測組織細胞中的糖成分,陽性部位呈黃綠色熒光。
7.注意事項
(1)固定液:以Bouin固定液為佳,也可用70%乙醇固定;
(2)與其他組織化學方法一樣,染色過程中,應始終保持一定濕度,使切片保持濕潤狀態;
(3)需經預實驗確定FITC-凝集素的*佳工作濃度;
(4)凝集素的活性部位需重金屬離子維持,故可用TBS作為緩沖液,加微量的金屬(CaCl2、MgCl2、MnCl2各1.0mmol/L),可增強凝集素的結合能力。
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