親和層析又稱功能層析(Function Chromatography)。其原理是:利用生物大分子與其特異性配基之間的特異結(jié)合能力的特性,先將配基交聯(lián)到層析介質(zhì)上,制成親和層析介質(zhì)。將含有該生物大分子的待分離樣品上樣后,該生物大分子將被特異性吸附在親和層析介質(zhì)上,而樣品中的其它物質(zhì)全部流穿被去除;在改變洗脫條件時,就可以把被特異性吸附的生物分子洗脫下來。一種親和層析介質(zhì)只能用于一種或有限的一類生物分子的分離純化。理論上,所有的能特異性結(jié)合的配基對均能利用親和層析原理,制成親和層析介質(zhì),用于其配基的分離純化。
將具有特殊結(jié)構(gòu)的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中,當要被分離的蛋白混合液通過層析柱時,與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質(zhì)由于不被吸附,直接流出,從而與被分離的蛋白質(zhì)分開,然后選用適當?shù)南疵撘海淖兘Y(jié)合條件將被結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來,這種分離純化蛋白質(zhì)的方法稱為親和層析。利用共價連接有特異配體的層析介質(zhì)分離蛋白質(zhì)混合物中能特異結(jié)合配體的目的蛋白或其它分子的層析技術(shù)。
親和層析是一種吸附層析,抗原(或 抗體)和相應的抗體(或抗原)發(fā)生特異性結(jié)合,而這種結(jié)合在一定的條件下又是可逆的。所以將抗原(或 抗體)固相化后,就可以使存在液相中的相應抗體(或抗原)選擇性地結(jié)合在固相載體上,借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開,達到分離提純的目的。
此法具有**、快速、簡便等優(yōu)點。