PEG蛋白質的修飾主要是通過PEG末端羥基與蛋白質氨基酸殘留的反應來實現的，而PEG末端羥基的活性很差。

　　為了在體內溫和的條件下共同修飾蛋白質，必須使用活化劑進行活化。

    常用的PEG活化方法包括：

　　(1)二咪唑法:該方法**用于多肽合成，被證明是形成酰胺鍵的好試劑。

　　(2)N-羥基琥珀酰亞胺法:(a)N、N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化，這種反應也需要在無水條件下進行。(B)琥珀酸酐和N-羥基琥珀酰亞胺活化。該方法活化的聚乙二醇活性較高。**偶爾在非水環境中連接蛋白質。

　　(3)氰脲酰氯法：氰脲酰氯，又稱三氯化嗪(TST)，是一種對稱的雜環化合物。只有一個氯原子被TST和聚乙二醇上的羥基反應所取代，其他氯原子與蛋白質氨基反應。

　　(4)光氣參與活化方法：Kurfuerst在其專利中提到了一些方法，即用N-羥基琥珀酰亞胺鉀鹽、硝基苯酚、三氯苯酚和光氣反應制備活化聚乙二醇。活化主要分為兩個步驟，如下圖所示。

　　(5)聚乙二醇對蛋白質半胱氨酸殘基的化學修飾，以谷氨酰胺酶(G-TGase)為例。除了傳統的化學修飾方法外，還可以通過酶催化來修飾，以谷氨酰胺酶(G-TGase)為例。

　　最后，選擇合適的蛋白質氨基酸殘留點或小分子**點進行定點修改。用活性PEG修改合適的蛋白質氨基酸殘留基，提高天然蛋白質的療效。