UDP-Glc焦磷酸化酶(UGPase)是產(chǎn)生UDP-Glc的一種必需酶,它被用于數(shù)百個糖基化反應(yīng),包括向各種化合物添加Glc。本研究從大麥UGPase的底物對蛋白質(zhì)活性和四級結(jié)構(gòu)的影響等方面對其進(jìn)行了表征。
其與Glc-1-P和UTP的Km值分別為0.33和0.25 mM。除以Glc-1-P作為底物外,該酶對Gal-1-P也具有相當(dāng)?shù)幕钚?然而,Gal-1-P的Km值非常高(>10 mM),使這種反應(yīng)在生理條件下不太可能發(fā)生。
無論反應(yīng)方向如何,UGPase的**pH值都較寬,為6.5-8.5。酶的平衡常數(shù)為0.4,表明該反應(yīng)對Glc-1-P的合成方向略有偏好。
通過氣相電泳遷移大分子分析(GEMMA)研究,酶的四級結(jié)構(gòu)受單個或兩個底物在反應(yīng)的任意方向的添加的影響,導(dǎo)致UGPase二聚體向單體轉(zhuǎn)移,這是酶的活性形式。
底物誘導(dǎo)的酶的四級結(jié)構(gòu)的變化可能有調(diào)節(jié)作用,以確保**的活性。討論了影響UGPase齊聚狀態(tài)的動力學(xué)和因素。
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