UDP糖|擬薄角藻副漿和其他碳水化合物的代謝:動力學表征,結構和細胞定位的葡萄糖焦磷酸化酶
許多寡聚物和多糖(包括paramylon)在滸苔蟲的生命周期中至關重要,它們是由糖基轉移酶以udp -葡萄糖為底物合成的。
在此,我們報道了一種擬在gracilis中編碼udp -葡萄糖焦磷酸化酶(EgrUDP-GlcPPase)的基因的分子克隆。在大腸桿菌中進行外源表達后,對重組酶進行了結構和功能鑒定。
高度純化的EgrUDP-GlcPPase表現出單體結構,能夠催化udp -葡萄糖的合成,Vmax為3350 U.mg?1。葡萄糖- 1p和UTP是**底物,但酶也使用(催化效率較低)TTP、半乳糖- 1p和甘露糖- 1p。
過氧化氫的氧化使酶失活,這種作用被二硫蘇糖醇或硫氧還蛋白的還原逆轉。由于在蛋白質的三維結構中,7個半胱氨酸殘基的距離不夠近,無法形成二硫鍵,因此氧化還原過程中會產生硫酸。
電泳研究表明,在氧化后,該酶排列在許多酶不活躍的結構構象;它們也在體內被檢測到。最后,共聚焦熒光顯微鏡為胞質(主要在鞭毛)酶的定位提供了證據。
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