UDP糖|大腸桿菌中糖甘油脂生產的代謝工程:調節磷脂酸和udp -葡萄糖通路
糖脂作為生物表面活性劑、生物材料和生物活性分子,是生物技術和生物醫學領域的靶標分子。
一種用于生產糖甘油脂(GGL)的工程大腸桿菌菌株使用生殖支原體的MG517糖脂合酶將糖基從UDPGlc轉移到甘油二酰基受體(Mora-Buyé et al., 2012)。
胞內甘油二酰基池是GGL生成的限制因素。在這里,我們設計了不同的代謝工程策略,通過調節脂肪酸、酰基供體和磷脂酸的生物合成來提高糖脂合酶前體底物的可用性。
德莎的淘汰賽,褪色和fabR基因參與脂肪酸降解,超表達的轉錄監管機構FadR,酰基轉移酶的PlsB和C,和焦磷酸酶鼎暉磷脂酸生物合成,以及磷酸酶PgpB轉換為二酰基甘油進行了探討,目的是改善GGL滴度。
在不同的工程菌株中,MG517共表達的ΔtesA菌株和融合的PlsCxPgpB蛋白的產量最高,與單獨表達MG517的親本菌株相比,GGL滴度提高了350%。
通過過表達尿苷轉移酶GalU或敲除udp -糖二磷酸酶編碼基因ushA來提高UDPGlc的**性并沒有進一步提高GGL的效價。大多數菌株產生的GGL含有從單糖到四糖的不同數量的葡萄糖基單位。
有趣的是,共表達Cdh的菌株GGL譜向二糖基化脂質轉移(占GGLs總量的80%),而fadR敲除的菌株具有更多的不飽和酰基鏈。
在所有情況下,GGL的產生改變了大腸桿菌膜的脂質組成,觀察到GGL取代磷脂酰乙醇胺來維持膜的總體電荷平衡。
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