udp -鼠李糖是由udp -鼠李糖合成酶合成的,但該反應需要兩種輔助因子NAD+和NADPH。本文介紹了一種輔助因子自給自足的udp -鼠李糖再生系統。
從葡萄中克隆了udp -鼠李糖合成酶(VvRHM)基因,并在大腸桿菌中進行了表達和鑒定。
的氨基端地區VvRHM與雙功能融合UDP-4-keto-6-deoxy-d-glucose 3, 5-epimerase / UDP-4-keto-rhamnose 4-keto-reductase (NRS / ER)從擬南芥獲得融合酶(VvRHM-NRS),這是NADPH-independent和可以轉換UDP-glucose UDP-rhamnose NADH自給自足。
VvRHM-NRS的**活性為pH值7.5和30℃。
VvRHM-NRS的表觀Km和Vmax分別為88±9 μM和12.7±0.6 nmol/min/mg, NAD+的表觀Km和Vmax分別為69±7 μM和11.9±0.5 nmol/min/mg。
利用VvRHM-NRS與甘氨酸max蔗糖合酶(Glycine max蔗糖合酶,GmSUS)結合,建立了以蔗糖、NAD+和UDP為原料合成UDP-鼠李糖的新工藝。
通過優化耦合反應條件,udp -鼠李糖的產量達到0.57 mM。
最后,以擬南芥糖基轉移酶(AtUGT78D1)為原料,采用udp -鼠李糖再生體系合成槲皮素。
因此,VvRHM-NRS結合GmSUS為黃酮類等生物活性物質糖基化過程中udp -鼠李糖再生提供了一種綠色化學途徑。
UDP-L-RhaNAc | UDP-4n-D-FucNAc |
UDP-D-XylNAc | UDP-VioNAc |
UDP-2-Biotinyl-GalNAc | UDP-6-Biotinyl-GalNAc |
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