UDP 糖|干酪乳桿菌中同源過表達葡萄糖焦磷酸化酶增強葡萄糖和半乳糖
在糖基轉移酶催化下,udp -糖被廣泛用作低聚糖合成的底物。
在本研究中,一種旨在將碳通量導向udp -葡萄糖和udp -半乳糖生物合成的代謝工程策略已成功應用于干酪乳桿菌。
在可誘導的nisA啟動子控制下,克隆了干酪乳桿菌BL23中udp -葡萄糖焦磷酸化酶(galU)的galU基因,并通過同源過表達驗證了該基因的功能。
值得注意的是,GalU活性增加約80倍,導致udp -葡萄糖增加約9倍,udp -半乳糖增加約4倍。
這表明,內源性的udp -半乳糖4-異丙基酶(GalE)活性,即相互轉換udp -糖,不足以維持udp -葡萄糖/ udp -半乳糖的比例。
將編碼galE的干酪乳桿菌galE基因克隆到galU的下游,并轉化到干酪乳桿菌中。
重組菌株的GalE活性增加了4倍,但這一增加并不影響該比例,表明GalE對udp -半乳糖的親和力高于對udp -葡萄糖的親和力。
在這里構建的干酪乳桿菌菌株在細胞內積累了高水平的udp -糖,將是足夠的宿主生產低聚糖。
UDP-L-RhaNAc | UDP-4n-D-FucNAc |
UDP-D-XylNAc | UDP-VioNAc |
UDP-2-Biotinyl-GalNAc | UDP-6-Biotinyl-GalNAc |
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