UDP 糖|產氣腸桿菌IFO 12010的udp -糖水解酶基因(ushA)的克隆與鑒定
細菌堿性磷酸酶(BAP, phoA基因產物)主要負責底物5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸鹽對甲苯胺(XP)和對硝基苯磷酸鹽(pNPP)的水解。利用這些底物和大腸桿菌phoA突變體,
我們克隆了具有XP+表型的產氣腸桿菌基因。
根據表型測試和DNA序列確定了兩種類型的克隆。
其中一個是擬產氧大腸桿菌phoA基因(XP+, pNPP+);令人驚訝的是,
另一個被發現是ushA基因(XP+, pNPP?),它編碼UDP(尿苷5 ' -二磷酸)糖水解酶。
產氣桿菌ushA基因與大腸桿菌ushA和鼠傷寒沙門氏菌ushA0基因在核苷酸(超過79%)和氨基酸(超過93%)水平上具有高度的序列同源性。
在大腸桿菌中,產氣大腸桿菌ushA基因的表達產生了高水平的udp糖水解酶,
TLC(薄層色譜)分析證實了這一點,同時存在一個強條帶,這是由于在聚丙烯酰胺凝膠上的XP水解。
UDP-L-RhaNAc | UDP-4n-D-FucNAc |
UDP-D-XylNAc | UDP-VioNAc |
UDP-2-Biotinyl-GalNAc | UDP-6-Biotinyl-GalNAc |
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