udp 糖|udp -糖結合牛肝尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶的特殊作用
通過平衡透析檢測尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶與NADH的結合。udp 糖的存在對NADH的結合是必要的。
其他類似物如UDPxylose, udp 糖和UDPglucuronic acid不能取代UDPglucose作為NADH結合的效應物。
udp木糖與UDPglucose爭奪udp 糖結合位點,從而釋放結合的NADH。在UDPglucose存在的情況下,NADH與UDPglucose脫氫酶的結合達到飽和**,每個酶六聚體結合3 mol NADH,并表現出正協同作用,Hill數= 1.34。
此外,還研究了udp -糖對催化位點衍生的udp葡萄糖脫氫酶熒光的影響。
已經檢測到兩類udpxy糖結合位點。其中一類具有較高的親和力(Kdiss = 3 μM,由平衡透析測定),但不影響熒光團的熒光,而另一類具有較低的親和力(Kdiss = 120 μM),并導致紅移熒光猝滅,可能是通過影響熒光團對溶劑的暴露來實現的。
高親和位點被確定為未活化催化位點的udp -糖基位,而低親和位點被確定為熒光標記催化位點的udp -糖基位。
UDP-L-RhaNAc | UDP-4n-D-FucNAc |
UDP-D-XylNAc | UDP-VioNAc |
UDP-2-Biotinyl-GalNAc | UDP-6-Biotinyl-GalNAc |
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