CFH-DA 活性氧ROS熒光探針廣泛用于監(jiān)測細(xì)胞氧化還原的過程。2'，7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯（也稱為2'，7'二氯熒光素二乙酸酯）被細(xì)胞酯酶水解成2'，7'-二氯二氫熒光素（也稱為2'，7'-二氯熒光素），然后被氧化成2' ，7'-二氯熒光素主要由H2O2。 2'，7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯可能在細(xì)胞內(nèi)氧化劑應(yīng)激期間對廣泛的氧化反應(yīng)具有反應(yīng)性。

產(chǎn)品說明書

Ex (nm)          504

Em (nm)        529

分子量          487.29

溶劑              DMSO

用于染色細(xì)胞的樣品方案

以下過程提供了一般準(zhǔn)則，實際情況應(yīng)根據(jù)您的特定應(yīng)用進(jìn)行修改。

1.制備1-10mM DMSO儲備溶液。 應(yīng)將未使用的DMSO儲備溶液等分到單次使用的小瓶中并儲存在-20℃，避光。

2.在生理緩沖液（如PBS，HBSS，HEPES）中使染料的工作濃度為1-10μM。必須根據(jù)經(jīng)驗確定工作濃度。

3.從生長培養(yǎng)基中取出細(xì)胞，將染料工作溶液（來自步驟2）加入細(xì)胞中，并在室溫或37℃下孵育細(xì)胞5-60分鐘。

4.去除染料工作溶液; 用預(yù)熱的HBSS洗滌，加入預(yù)熱的HBSS或生長培養(yǎng)基，在溫度下孵育。 恢復(fù)時間可以廣泛變化，因為一些細(xì)胞類型通常表現(xiàn)出低水平的酯酶活性。

5.在將細(xì)胞暴露于實驗誘導(dǎo)物之前，確定加載細(xì)胞樣品的基線熒光強度。

6.陰性對照應(yīng)評估如下：

6.1檢查未染色的細(xì)胞在綠色發(fā)射范圍內(nèi)的自發(fā)熒光。

6.2對于流式細(xì)胞術(shù)，確定染料加載和處理后細(xì)胞的正向和側(cè)向散射不變。細(xì)胞尺寸的變化可能與處理或毒性反應(yīng)引起的起泡或收縮有關(guān)。

6.3檢測有/沒有誘導(dǎo)物的染料和緩沖液/培養(yǎng)基的無細(xì)胞混合物的熒光。在沒有細(xì)胞外酯酶和其他氧化酶的情況下，熒光隨時間的逐漸增加可能與自發(fā)水解，大氣氧化和 /或光誘導(dǎo)氧化。

6.4檢查已經(jīng)保存在生長培養(yǎng)基或簡單緩沖液中的未處理（對照）負(fù)載細(xì)胞的熒光。 在健康細(xì)胞中，氧自由基被細(xì)胞酶和/或細(xì)胞酶消除**抗氧化劑。 在染料加載恢復(fù)期后，健康細(xì)胞應(yīng)表現(xiàn)出低水平的熒光，在實驗期間相對穩(wěn)定; 然而，可以觀察到熒光逐漸增加（由于自動氧化）或減少（由于細(xì)胞中的染料損失或光漂白）。 在沒有任何刺激或誘導(dǎo)的情況下，健康的未經(jīng)處理的細(xì)胞中的熒光突發(fā)可以指示細(xì)胞死亡或一些其他氧化事件的進(jìn)展。

7.可以用H2O2或叔丁基過氧化氫（TBHP）刺激陽性對照-終濃度~100μM（基于細(xì)胞的**性和反應(yīng)增加或減少劑量）。