H2DCFDA (DCFH-DA) 是一種可滲透細胞的，用于檢測細胞內活性氧 (ROS) 的探針 (Ex/Em=488/525 nm)，H2DCFDA (DCFH-DA) 別稱有以下的叫法：

DCFH-DA 活性氧ROS熒光探針

英文名稱:2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate

DCFH-DA，羥基自由基探針，cas4091-99-0

活性氧熒光探針(DCFH-DA)

H2DCFDA(DCFH-DA)

2',7'-二氯熒光素二乙酸酯

2,7-二氯二氫熒光素二乙酸酯

2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein Diacetate

DCFH-DA 活性氧ROS熒光探針

2',7'-DICHLOROFLUORESCIN DIACETATE, FOR FLUORESCENCE

2-(2,7-Dichloro-3,6-diacetoxy-9H-xanthen-9-yl)benzoic acid

DCFH-DA, ROS 探針

細胞內活性氧檢測探針DCFH-DA

H2DCFDA(DCFH-DA)是一種通用的氧化應激指示劑

H2DCFDA (DCFH-DA) 活性氧(ROS)熒光探針

DCFH-DA激發波長

DCFH-DA分子量

DCFH-DA活性氧檢測原理和步驟

活性氧熒光探針(DCFH-DA)，H2DCFDA，ROS熒光探針

2',7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯，2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate，4091-99-0

DCFH-DA使用說明書：

本品以粉末形式提供，可直接溶于無水DMSO配制成1-10mM儲存液，常用工作濃度1-10μM，需根據自身的實驗體系或參考文獻進行優化。
主要參數：
CAS NO：4091-99-0
分子式：C24H16Cl2O7
分子量：487.29
純度：≥97%
外觀：白色-帶黃色光澤的白色粉末
溶解性：溶于DMSO（25mg/ml）、DMF（25mg/ml）、無水乙醇（25mg/ml）
結構式：

保存：-20oC避光干燥保存，-少2年。

注意事項：
1．有機溶劑如DMSO儲存液需分裝成單次用量后，-20oC避光保存，避免反復凍融。
2．為了您的和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法：
以下步驟是來源于大量文獻總結的簡易操作流程，僅作參考。用戶需根據特定的應用和敏感性來做調整。
1．將低溫保存的凍干粉取出回-室溫，低速離心使粉末落到瓶底。之后加入適量無水DMSO或其他有機溶劑配制成1-10mM儲存液。未用完的DMSO儲存液需分裝并避光凍存在-20℃，避免反復凍融。
2．于正式實驗前，用生理鹽緩沖液（比如：PBS，HBSS，HEPES）稀釋到工作濃度1-10μM。需根據具體應用來調整合適的工作濃度。
3．吸走培養液，加入步驟2）配制的染色工作液到細胞內，室溫或30℃孵育5~60min。
4．吸走染色工作液，用預熱的生理緩沖液或細胞培養液清洗一遍。重新加入預熱的生理緩沖液或細胞培養液，在適宜溫度內孵育。對于二乙酸酯衍生物，需要短暫復原時間讓細胞內酯酶將其水解，從而讓染料對氧化應激產生反應。佳的復原時間范圍很廣，由于某些細胞類型通常顯示**低水平的酯酶活性。
5．將細胞暴露于實驗刺激物之前，先測定加載細胞的背景熒光強度。
6．根據以下情況評估陰性對照（Negative control），
①綠色發射光譜內檢查未染色細胞的自熒光情況。
②對于流式分析，查明染料加載和處理后細胞的前向角散射和側向角散射是不變。細胞尺寸的變化可能與起泡或萎縮有關，由于處理或有毒反應引起的。
③對包含和不包含刺激物的染料和緩沖液/培養基的無細胞混合物進行熒光檢測。在不含細胞外酯酶和其他氧化酶的情況下，隨著時間熒光的逐漸增加可能與瞬間水解、空氣氧化、和/或光誘導氧化有關。
④檢查培養在生長培養液或簡單緩沖液內的未處理加載細胞（對照）的熒光。在健康細胞內，細胞內酶和/或抗氧化劑會清除這些氧自由基。經過染料加載復原時間后，健康細胞應該表現出低水平的熒光信號，且在整個實驗期間相對穩定。然而，逐漸增加（由于自氧化）或降低（由于細胞內染料喪失或光淬滅）也有可能觀察到。在不含任何刺激物或誘導劑的體系內，健康和未處理細胞突然發現強熒光，表明細胞發生死亡或一些其他的氧化事件。
7．建立陽性對照，可能用以下方法刺激氧化活性：
①促進劑（PMA，工作濃度100pM~10μM）
② H2O2或TBHP（終濃度~100μM）（根據細胞本身對其的靈敏度和反應性來提高或降低濃度）
8．確保刺激**或化合物不會引起染料熒光淬滅。檢查化合物的吸收光譜，確定化合物的吸收峰不會與氧化后染料的大激發或發射光譜發生重疊。

西安齊岳生物提供一部分熒光探針

在紫外-可見-近紅外區有特征熒光，并且其 熒光性質（激發和發射波長、 強度、壽命、 偏振等）可隨所處環境的性質，如極性、折射率、粘度等改變而靈敏地改變的一類熒光性分子。

發光探針：

小編zhn2021.11.11