一、Ni柱親和層析
1、自制的簡易柱子，直徑約為1cm，長度約為2cm，在柱子的下端加入蒸餾水，并關閉柱子的出口。
2、將瓊脂糖凝膠倒入柱子，讓填料自然沉降，依次用二到五倍的柱子體積的無菌水、8mol/L的尿素、無菌水洗柱子。
3、緩慢加入5ml的硫酸鎳，至柱子的顏色由白色變為藍色，待藍綠色收集液體滴下來為止。
4、用二到五倍體積的PBS緩沖液平衡柱子，再將粗蛋白樣品進行上樣，用梯度濃度50mmol/L、70mmol/L、150mmol/L、250mmol/L咪唑進行過柱，流速約為1ml/min。
5、以每個濃度用1.5ml的Eppendorf收集八管，再用二到五倍體積的無菌水洗柱子，再用二到五倍的50mmol/L的EDTA洗柱子，除去NiSO4，待至無色狀態
6、用多倍體積的無菌水進行洗柱子，將手機液10%的分離膠進行SDS—PAGE分析。
二、離子交換層析
1、將macro prep High-Q強陰離子交換填料混勻，吸取16 ml于小燒杯中，靜置待填料沉降至燒杯底部，吸取并棄去上清。
2、在燒杯中加入4倍體積的ddH2O，混勻，靜置，沉降后去上清。重復2次以充分洗去保存填料中的乙醇。
3、在空柱中加入柱體積10%的裝柱緩沖液，靜置除去可能存在于柱壁和柱底部薄膜上的氣泡。
4、以1:1（v/v）比例在燒杯中加入裝柱緩沖液（20 mM sodium phosphate, pH 7.0, 1 M NaCl），混勻。用玻璃棒引流加入至柱中，并用裝柱緩沖液填滿剩余柱體積。靜置30 min。
5、待填料均沉降至柱底部后，將適配器以較小的傾斜角度插入至柱中填料頂部。
（1）打開柱低端開口，以較大流速10 ml/min泵入裝柱緩沖液，壓實填料。
（2）緩慢降低緩沖液的流速，并將裝柱緩沖液更換成結合緩沖液（20 mM sodium phosphate, pH 7.0）。
（3）設定蛋白純化程序，使用15倍柱體積緩沖液線性梯度洗脫目的蛋白。
（4）收集流出液，進行SDS-PAGE檢測。
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