NHS-Biotin是常用的胺反應性生物素衍生物，用于修飾蛋白質和其他生物分子。 這種伯胺偶聯劑已成功用于體內選擇性標記大腸桿菌細胞包膜蛋白。 它先標記外膜、周質和內膜蛋白以及特定的內膜標記蛋白 (Tet-LacZ)。

反應原理

已知生物素與抗生物素蛋白牢固結合，其特性已廣泛用于高靈敏度分析。由于生物素與抗生物素蛋白之間的結合穩定性常數為1015，比抗原-抗體反應高3至4個數量級，因此一旦結合至抗生物素蛋白的生物素在生理條件下不會脫落。

另外，生物素是具有羧基的小分子，可以容易地化學修飾，并且可以在不損害蛋白質等的活性的情況下進行標記。

因此，已經開發出許多生物素化合物作為使用抗體進行免疫測定的標記劑。

具有活性酯基的生物素通常用于與蛋白質的氨基（NH2）結合，具有馬來酰亞胺基的生物素用于巰基（SH）。

蛋白質的生物素標記操作方法

1) 用10mmol/l Bicine Buffer (pH8.5) 溶解蛋白質，制成蛋白質溶液。

2) 在蛋白質溶液中加入配制好的生物素標記試劑溶液，蛋白質：生物素標記試劑的混合摩爾比為1:2-1:10。

3) 充分混合后，在水浴恒溫搖床 (25 ℃) 中培養2-4 h。